CAJ | 학술논문

目的:通过基因工程技术获得完全人源化的卵巢癌患者自身的单链抗体并在毕氏酵母中获得表达,为人源化单链抗体(ScFv)在卵巢癌的诊断与治疗的应用提供实验基础.方法:用TRIZOL法自卵巢癌患者的淋巴细胞中提取RNA,利用SOEingPCR方法分别获得VH、VL基因,构建真核表达载体pPICZαa/ScFv.电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选转染阳性克隆,SDS-PAGE法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的ScFv的表达,筛选高表达工程菌.结果:构建ScFv基因,VH与VL连接后得到700 bp左右的条带,ScFv基因在毕赤酵母中获得表达,在26 000处出现目的条带.结论:获得ScFv基因及其真核表达载体以及高效表达ScFv的毕赤酵母工程菌.
목적:통과기인공정기술획득완전인원화적란소암환자자신적단련항체병재필씨효모중획득표체,위인원화단련항체(ScFv)재란소암적진단여치료적응용제공실험기출.방법:용TRIZOL법자란소암환자적림파세포중제취RNA,이용SOEingPCR방법분별획득VH、VL기인,구건진핵표체재체pPICZαa/ScFv.전전화필적효모균주X-33.용PCR법사선전염양성극륭,SDS-PAGE법감정갑순유도적배양상청액중적ScFv적표체,사선고표체공정균.결과:구건ScFv기인,VH여VL련접후득도700 bp좌우적조대,ScFv기인재필적효모중획득표체,재26 000처출현목적조대.결론:획득ScFv기인급기진핵표체재체이급고효표체ScFv적필적효모공정균.