湖北畜牧兽医
湖北畜牧獸醫
호북축목수의
HUBEI JOURNAL OF ANIMAL AND VETERINARY SCIENCES
2010年
10期
8-11
,共4页
罗吉新%李海妙%林志达%王振全%苏惠龙%罗宝正
囉吉新%李海妙%林誌達%王振全%囌惠龍%囉寶正
라길신%리해묘%림지체%왕진전%소혜룡%라보정
多重RT-PCR%甲型流感病毒%H1N1亚型
多重RT-PCR%甲型流感病毒%H1N1亞型
다중RT-PCR%갑형류감병독%H1N1아형
为了建立快速检测新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技术,根据GenBank中公布甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,设计并合成两套特异性引物.使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR试剂盒和自行设计合成的引物建立多重RT-PCR反应,按照预期的PCR产物序列合成的DNA作为阳性对照.结果表明,该方法具有良好的特异性,可以将甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)与传统甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亚型流感病毒区分.该方法同时具有较高的灵敏度,最低可以检测到100个拷贝的阳性克隆质粒.在对183份发热病人临床咽拭子样品检测中发现了10份阳性样品,对350份猪鼻腔拭子样品检测全部呈阴性,结果与中国检验栓疫科学研究院试剂盒检测结果一致,说明了该多重RT-PCR方法在临床检测新型甲型H1N1流感病毒方面具有广阔的应用前景.
為瞭建立快速檢測新型甲型H1N1流感病毒的多重PCR技術,根據GenBank中公佈甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)的HA和NA基因序列,設計併閤成兩套特異性引物.使用TaKaRa公司的一步法RT-PCR試劑盒和自行設計閤成的引物建立多重RT-PCR反應,按照預期的PCR產物序列閤成的DNA作為暘性對照.結果錶明,該方法具有良好的特異性,可以將甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)與傳統甲型H1N1、H3N2、H5N1、H6N2和H9N2亞型流感病毒區分.該方法同時具有較高的靈敏度,最低可以檢測到100箇拷貝的暘性剋隆質粒.在對183份髮熱病人臨床嚥拭子樣品檢測中髮現瞭10份暘性樣品,對350份豬鼻腔拭子樣品檢測全部呈陰性,結果與中國檢驗栓疫科學研究院試劑盒檢測結果一緻,說明瞭該多重RT-PCR方法在臨床檢測新型甲型H1N1流感病毒方麵具有廣闊的應用前景.
위료건립쾌속검측신형갑형H1N1류감병독적다중PCR기술,근거GenBank중공포갑형H1N1류감병독(2009년류행주)적HA화NA기인서렬,설계병합성량투특이성인물.사용TaKaRa공사적일보법RT-PCR시제합화자행설계합성적인물건립다중RT-PCR반응,안조예기적PCR산물서렬합성적DNA작위양성대조.결과표명,해방법구유량호적특이성,가이장갑형H1N1류감병독(2009년류행주)여전통갑형H1N1、H3N2、H5N1、H6N2화H9N2아형류감병독구분.해방법동시구유교고적령민도,최저가이검측도100개고패적양성극륭질립.재대183빈발열병인림상인식자양품검측중발현료10빈양성양품,대350빈저비강식자양품검측전부정음성,결과여중국검험전역과학연구원시제합검측결과일치,설명료해다중RT-PCR방법재림상검측신형갑형H1N1류감병독방면구유엄활적응용전경.
