吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2011年
3期
327-331
,共5页
卢可%刘松财%王楠%曹锦艳%张永亮%郝林琳
盧可%劉鬆財%王楠%曹錦豔%張永亮%郝林琳
로가%류송재%왕남%조금염%장영량%학림림
生长抑素%shRNA%幔病毒载体%基因沉默
生長抑素%shRNA%幔病毒載體%基因沉默
생장억소%shRNA%만병독재체%기인침묵
采用幔病毒(LV)载体介导siRNA感染宿主细胞,研究其对内源性生长抑素(Somatostatin,SS)的抑制作用.首先将筛选出的psh2与辅助质粒共转染293T细胞包装获得假病毒颗粒LV-sh2,同时,包装产生LV-sh0和LV-GFP作为阴性对照.超速离心,梯度稀释法测定病毒滴度,结果提示所构建的重组病毒滴度约为6×107ifu/mL.病毒感染BHK-21细胞,通过荧光显微镜观察到了GFP的高效表达,在感染细胞的基因组中PCR检测到了病毒基因,表明病毒感染获得了高效的基因转移和表达效率.荧光定量PCR和RIA检测表明,LV-sh2对内源性SS的mRNA和蛋白质水平均有显著的抑制作用(86.49%和78.80%,P＜0.05).
採用幔病毒(LV)載體介導siRNA感染宿主細胞,研究其對內源性生長抑素(Somatostatin,SS)的抑製作用.首先將篩選齣的psh2與輔助質粒共轉染293T細胞包裝穫得假病毒顆粒LV-sh2,同時,包裝產生LV-sh0和LV-GFP作為陰性對照.超速離心,梯度稀釋法測定病毒滴度,結果提示所構建的重組病毒滴度約為6×107ifu/mL.病毒感染BHK-21細胞,通過熒光顯微鏡觀察到瞭GFP的高效錶達,在感染細胞的基因組中PCR檢測到瞭病毒基因,錶明病毒感染穫得瞭高效的基因轉移和錶達效率.熒光定量PCR和RIA檢測錶明,LV-sh2對內源性SS的mRNA和蛋白質水平均有顯著的抑製作用(86.49%和78.80%,P＜0.05).
채용만병독(LV)재체개도siRNA감염숙주세포,연구기대내원성생장억소(Somatostatin,SS)적억제작용.수선장사선출적psh2여보조질립공전염293T세포포장획득가병독과립LV-sh2,동시,포장산생LV-sh0화LV-GFP작위음성대조.초속리심,제도희석법측정병독적도,결과제시소구건적중조병독적도약위6×107ifu/mL.병독감염BHK-21세포,통과형광현미경관찰도료GFP적고효표체,재감염세포적기인조중PCR검측도료병독기인,표명병독감염획득료고효적기인전이화표체효솔.형광정량PCR화RIA검측표명,LV-sh2대내원성SS적mRNA화단백질수평균유현저적억제작용(86.49%화78.80%,P＜0.05).
