CAJ | 학술논문

建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P＜0.01),而精子转染率呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P＞0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.
건립은정적정자재체법기술체계대가축적전기인육충등연구구유중요의의.위획득공저정자여DNA최가공부육시간,우화건립저정자재체법기술체계,본연구통과정량PCR、형광현미경검측화정액상규분석방법등,연구분석저정자여DNA불동공부육시간대저정자활력、활솔、DNA전염솔、흡부DNA화내화DNA량적영향.결과표명,다취을희아알(polyethyleneimine,PEI)포과적표기DNA여정자공부육15、30、60화90 min후,수착부육시간적연장,정자활력화활솔유겁현저하강(P＜0.01),이정자전염솔정겁현저(P＜0.01)혹현저(P＜0.05)상승,흡부외원DNA량화내화외원DNA량야정상승추세,단시30 min후불동부육시간지간차이불현저(P＞0.05).차외,수착공부육시간적연장,여정자전염솔제고폭도상비,정자활력화활솔적하강폭도경명현.종합고필정자활력、활솔、전염솔、흡부DNA량화내화DNA량등삼수,저정자여외원DNA공부육시간이30 min위최가.