畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2012年
8期
1266-1272
,共7页
王凡%刘建斌%祝秀梅%吕志慧%马全英%杜平%刘学荣%牟克斌
王凡%劉建斌%祝秀梅%呂誌慧%馬全英%杜平%劉學榮%牟剋斌
왕범%류건빈%축수매%려지혜%마전영%두평%류학영%모극빈
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)%GP3蛋白%GP5蛋白%M蛋白
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)%GP3蛋白%GP5蛋白%M蛋白
저번식여호흡종합정병독(PRRSV)%GP3단백%GP5단백%M단백
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒.以PRRSV LN株为模板,采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段,将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5-M,然后将GP3与GP5-M双酶切后插入peDNA3.1(+)构建重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,将其转染COS7细胞.PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,间接免疫荧光检测表明GP3、GP5-M蛋白在COS7细胞内获得表达.Western blotting检测证实GP3、GP5、M蛋白获得正确表达,并且所表达的GP3、GP5、M蛋白是融合蛋白.将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免后2周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周中和抗体效价最高可达1∶32.进一步将pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫断奶仔猪,首免后4周即可产生1∶4～1∶8的中和抗体.本试验成功构建了表达PRRSV GP3、GP5和M融合蛋白的真核重组质粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗体检测表明pcDNA3.1-GP3-GP5 M具有良好的免疫原性,从而为PRRSV基因工程疫苗的研制奠定基础.
本試驗旨在構建錶達豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV) GP3、GP5和M蛋白的真覈重組質粒.以PRRSV LN株為模闆,採用PCR方法擴增齣GP3、GP5、M基因片段,將擴增的GP5、M通過Linker序列串聯成GP5-M,然後將GP3與GP5-M雙酶切後插入peDNA3.1(+)構建重組質粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,將其轉染COS7細胞.PCR鑒定錶明重組質粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M含有PRRSV GP3、GP5-M基因,間接免疫熒光檢測錶明GP3、GP5-M蛋白在COS7細胞內穫得錶達.Western blotting檢測證實GP3、GP5、M蛋白穫得正確錶達,併且所錶達的GP3、GP5、M蛋白是融閤蛋白.將pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫BALB/c小鼠,首免後2週可檢測到特異性PRRSV中和抗體,首免後8週中和抗體效價最高可達1∶32.進一步將pcDNA3.1-GP3-GP5-M免疫斷奶仔豬,首免後4週即可產生1∶4～1∶8的中和抗體.本試驗成功構建瞭錶達PRRSV GP3、GP5和M融閤蛋白的真覈重組質粒pcDNA3.1-GP3-GP5-M,中和抗體檢測錶明pcDNA3.1-GP3-GP5 M具有良好的免疫原性,從而為PRRSV基因工程疫苗的研製奠定基礎.
본시험지재구건표체저번식여호흡종합정병독(PRRSV) GP3、GP5화M단백적진핵중조질립.이PRRSV LN주위모판,채용PCR방법확증출GP3、GP5、M기인편단,장확증적GP5、M통과Linker서렬천련성GP5-M,연후장GP3여GP5-M쌍매절후삽입peDNA3.1(+)구건중조질립pcDNA3.1-GP3-GP5-M,장기전염COS7세포.PCR감정표명중조질립pcDNA3.1-GP3-GP5-M함유PRRSV GP3、GP5-M기인,간접면역형광검측표명GP3、GP5-M단백재COS7세포내획득표체.Western blotting검측증실GP3、GP5、M단백획득정학표체,병차소표체적GP3、GP5、M단백시융합단백.장pcDNA3.1-GP3-GP5-M면역BALB/c소서,수면후2주가검측도특이성PRRSV중화항체,수면후8주중화항체효개최고가체1∶32.진일보장pcDNA3.1-GP3-GP5-M면역단내자저,수면후4주즉가산생1∶4～1∶8적중화항체.본시험성공구건료표체PRRSV GP3、GP5화M융합단백적진핵중조질립pcDNA3.1-GP3-GP5-M,중화항체검측표명pcDNA3.1-GP3-GP5 M구유량호적면역원성,종이위PRRSV기인공정역묘적연제전정기출.
