CAJ | 학술논문

用PCR法将猪囊虫抗原表位n1、n2插入乙肝病毒核心蛋白(HBc)序列的第78～79位之间,将猪囊虫抗原表位n3接在149位之后,再将该序列克隆入pET28a载体中,构建了重组表达质粒pET28a-Δc-3n,在大肠杆菌中表达出融合蛋白,命名为PCCE.将PCCE纯化后免疫小鼠,以ELISA检测小鼠的体液免疫应答,Western blot检测抗体的特异性,Dot ELISA验证所选表位的保护性.另用绦虫卵攻击免疫小鼠,以观察疫苗的保护作用.测序结果表明,重组质粒构建成功;SDS-PAGE显示,融合蛋白表达正确,电镜证实有蛋白颗粒形成.对免疫小鼠应用ELISA检测到高滴度抗体;Western blot结果表明,免疫鼠体内诱导出了3种特异性抗体;Dot ELISA结果表明,所选表位对宿主可能具有保护性.绦虫卵攻击免疫小鼠试验表明,疫苗PCCE的相对保护率为89%.结论:成功地表达和纯化了以HBc为载体的携带3个猪囊虫表位的融合蛋白(PCCE),以PCCE作为疫苗免疫小鼠,能诱导较强的特异性体液免疫反应,免疫小鼠对绦虫卵攻击具有较好的免疫保护作用.
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