二硫键稳定的抗HIV-1 gp41单链抗体的构建及原核表达
이류건은정적항HIV-1 gp41단련항체적구건급원핵표체
Construction of Porkaryotic Expression Vector for Disulfide-stabilized HIV-1 gp41 Single Chain Antibody
  • 万方数据
    中国生物制品学杂志 중국생물제품학잡지
    CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
    2008年 3期 169-173 ,共5页

    佟敬山%李昌%金宁一%于源华%刘玉生%于芳%胡宁宁%李霄%张钰

    동경산%리창%금저일%우원화%류옥생%우방%호저저%리소%장옥

    人免疫缺陷病毒%gp41%单链抗体%原核表达%稳定性 人免疫缺陷病毒%gp41%單鏈抗體%原覈錶達%穩定性
    인면역결함병독%gp41%단련항체%원핵표체%은정성
    目的 构建二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并进行表达和鉴定.方法 采用PCR定点突变的方法,构建含二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体突变基因质粒pUC57-d41,BamHI和HindⅢ双酶切后,定向插入pET-28a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE、Western blot鉴定表达产物.对目的 蛋白进行纯化和复性,并进行抗原结合活性及相对稳定性检测.结果 重组载体pET-d41经酶切鉴定,证实构建正确.表达产物相对分子质量约为28 000,与理论预期值完全相符.目的 蛋白最高表达量可占菌体总蛋白的45.48%.经Ni-NTA亲和层析法纯化并复性后,蛋白纯度达95%以上,抗HIC-1gp41 dsFv具有抗原结合活性,稳定性优于scFv.结论 已成功构建了二硫键稳定的抗HIV-1gp41单链抗体(dsFv)基因原核表达载体,并获得表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.
    목적 구건이류건은정적항HIV-1gp41단련항체(dsFv)기인원핵표체재체,병진행표체화감정.방법 채용PCR정점돌변적방법,구건함이류건은정적항HIV-1gp41단련항체돌변기인질립pUC57-d41,BamHI화HindⅢ쌍매절후,정향삽입pET-28a(+),전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체,용SDS-PAGE、Western blot감정표체산물.대목적 단백진행순화화복성,병진행항원결합활성급상대은정성검측.결과 중조재체pET-d41경매절감정,증실구건정학.표체산물상대분자질량약위28 000,여이론예기치완전상부.목적 단백최고표체량가점균체총단백적45.48%.경Ni-NTA친화층석법순화병복성후,단백순도체95%이상,항HIC-1gp41 dsFv구유항원결합활성,은정성우우scFv.결론 이성공구건료이류건은정적항HIV-1gp41단련항체(dsFv)기인원핵표체재체,병획득표체,위진일보연구기생물학공능전정료기출.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문