CAJ | 학술논문

目的:探讨利用植块法与酶消化法相结合培养大鼠原代雪旺细胞的可行性;并研究其增殖规律.方法:取10只新生2～3d的SD大鼠双侧坐骨神经;剥除神经外膜;剪成约1mm3大小的碎块;用0.03%胶原酶和0.25%胰蛋白酶按1:2对神经碎块消化12min;加入少量含10%胎牛血清的DMED培养基小心吹打细胞及组织块;再植于培养皿中培养.用S-100免疫组化染色鉴定雪旺细胞;结合Hoechst3342染色计算其纯度;在显微镜下确定细胞数量.结果:在植块培养24h后即有大量细胞迁出;2～6d细胞生长迅速;10d以后生长较为缓慢;其倍增时间为2-3d.经S-100染色证实所培养细胞为雪旺细胞;结合Hoechst3342染色可得其培养8d时纯度为95.1%;传代后纯度可达96.3%.10只新生鼠培养12d后可得细胞数约为4.8×106个.结论:利用植块法与酶消化法相结合的方法可以迅速获得大量高纯度的雪旺细胞;其增殖速度在前6d最快;倍增时间为2.3d.
목적:탐토이용식괴법여매소화법상결합배양대서원대설왕세포적가행성;병연구기증식규률.방법:취10지신생2～3d적SD대서쌍측좌골신경;박제신경외막;전성약1mm3대소적쇄괴;용0.03%효원매화0.25%이단백매안1:2대신경쇄괴소화12min;가입소량함10%태우혈청적DMED배양기소심취타세포급조직괴;재식우배양명중배양.용S-100면역조화염색감정설왕세포;결합Hoechst3342염색계산기순도;재현미경하학정세포수량.결과:재식괴배양24h후즉유대량세포천출;2～6d세포생장신속;10d이후생장교위완만;기배증시간위2-3d.경S-100염색증실소배양세포위설왕세포;결합Hoechst3342염색가득기배양8d시순도위95.1%;전대후순도가체96.3%.10지신생서배양12d후가득세포수약위4.8×106개.결론:이용식괴법여매소화법상결합적방법가이신속획득대량고순도적설왕세포;기증식속도재전6d최쾌;배증시간위2.3d.