昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2008年
11期
1144-1150
,共7页
吴玛莉%朱家颖%胡萃%叶恭银
吳瑪莉%硃傢穎%鬍萃%葉恭銀
오마리%주가영%호췌%협공은
蝶蛹金小蜂%菜粉蝶%毒液%分离%血细胞延展%血细胞包囊
蝶蛹金小蜂%菜粉蝶%毒液%分離%血細胞延展%血細胞包囊
접용금소봉%채분접%독액%분리%혈세포연전%혈세포포낭
为了建立蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液抑制寄主血细胞免疫活性组分合适的分离纯化方法,就等电点沉淀法、乙醇沉淀法、75%硫酸铵沉淀法、75%硫酸铵沉淀法+40℃加热处理法,以及75%硫酸铵沉淀法分别与3种不同滤膜的分子大小截留法的组合等7种方法对毒液蛋白分离效果及活性的影响进行了比较.结果表明:等电点沉淀法获得的组分抑制寄主菜粉蝶Pieris rapae离体血细胞延展和包囊的活性最强,乙醇沉淀法次之,75%硫酸铵沉淀法最弱.从蛋白组分的SDS-PAGE图谱来看,等电点沉淀法获得毒液组分相对最纯,仅有3条主要谱带,分子量大小在45～116.2 kDa范围内;乙醇沉淀法次之,有5条主要谱带,分子量大小在24～116.2 kDa范围内;硫酸铵沉淀法的谱带组成与毒液蛋白粗提液相似.3种分子大小截留法获得的毒液组分的活性分析表明,强活性组分分子量大小可能都大于100 kDa.综合认为,7种方法中以等电点沉淀法提取分离蝶蛹金小蜂毒液蛋白相对为最适.
為瞭建立蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液抑製寄主血細胞免疫活性組分閤適的分離純化方法,就等電點沉澱法、乙醇沉澱法、75%硫痠銨沉澱法、75%硫痠銨沉澱法+40℃加熱處理法,以及75%硫痠銨沉澱法分彆與3種不同濾膜的分子大小截留法的組閤等7種方法對毒液蛋白分離效果及活性的影響進行瞭比較.結果錶明:等電點沉澱法穫得的組分抑製寄主菜粉蝶Pieris rapae離體血細胞延展和包囊的活性最彊,乙醇沉澱法次之,75%硫痠銨沉澱法最弱.從蛋白組分的SDS-PAGE圖譜來看,等電點沉澱法穫得毒液組分相對最純,僅有3條主要譜帶,分子量大小在45～116.2 kDa範圍內;乙醇沉澱法次之,有5條主要譜帶,分子量大小在24～116.2 kDa範圍內;硫痠銨沉澱法的譜帶組成與毒液蛋白粗提液相似.3種分子大小截留法穫得的毒液組分的活性分析錶明,彊活性組分分子量大小可能都大于100 kDa.綜閤認為,7種方法中以等電點沉澱法提取分離蝶蛹金小蜂毒液蛋白相對為最適.
위료건립접용금소봉Pteromalus puparum독액억제기주혈세포면역활성조분합괄적분리순화방법,취등전점침정법、을순침정법、75%류산안침정법、75%류산안침정법+40℃가열처리법,이급75%류산안침정법분별여3충불동려막적분자대소절류법적조합등7충방법대독액단백분리효과급활성적영향진행료비교.결과표명:등전점침정법획득적조분억제기주채분접Pieris rapae리체혈세포연전화포낭적활성최강,을순침정법차지,75%류산안침정법최약.종단백조분적SDS-PAGE도보래간,등전점침정법획득독액조분상대최순,부유3조주요보대,분자량대소재45～116.2 kDa범위내;을순침정법차지,유5조주요보대,분자량대소재24～116.2 kDa범위내;류산안침정법적보대조성여독액단백조제액상사.3충분자대소절류법획득적독액조분적활성분석표명,강활성조분분자량대소가능도대우100 kDa.종합인위,7충방법중이등전점침정법제취분리접용금소봉독액단백상대위최괄.
