生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2009年
5期
109-112,121
,共5页
朱大冕%陈全%李奕璇%朱道银
硃大冕%陳全%李奕璇%硃道銀
주대면%진전%리혁선%주도은
葡萄球菌肠毒素A%肺癌%基因治疗
葡萄毬菌腸毒素A%肺癌%基因治療
포도구균장독소A%폐암%기인치료
构建Survivin启动子调控的葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核表达质粒,检测其在人肺腺癌A549细胞中的特异性表达以及表达产物的超抗原活性.以PCR法扩增sea基因,以含有Survivin启动子为调控序列的pGL-S-RED质粒为基础,构建pGL-S-SEA真核表达质粒.用脂质体转染A549细胞,以RT-PCR法检测sea基因表达水平.制备健康献血者PBMC,用pGL-S-SEA质粒转染A549细胞的上清液和细胞裂解液进行PBMC刺激试验,以MTT法检测其促细胞增殖效应.结果显示,成功构建Survivin启动子调控的真核表达质粒pGL-S-SEA.重组质粒在A549细胞中启动了sea基因的表达,其转录强度为内参(GADPH基因)的65.96%,在对照MRC-5细胞中无明显表达.该质粒转化A549细胞的裂解液具有促进人PBMC增殖活性、上清液无明显促PBMC增殖作用,裂解液组、上清液组和PHA阳性对照组的刺激指数分别为1.29、0.95和1.58.结论成功构建pGL-S-SEA质粒,其在A549细胞的表达产物具有诱导人PBMC增殖的超抗原活性,为下一步将其作为基因疫苗治疗肺癌奠定了基础.
構建Survivin啟動子調控的葡萄毬菌腸毒素A(SEA)的真覈錶達質粒,檢測其在人肺腺癌A549細胞中的特異性錶達以及錶達產物的超抗原活性.以PCR法擴增sea基因,以含有Survivin啟動子為調控序列的pGL-S-RED質粒為基礎,構建pGL-S-SEA真覈錶達質粒.用脂質體轉染A549細胞,以RT-PCR法檢測sea基因錶達水平.製備健康獻血者PBMC,用pGL-S-SEA質粒轉染A549細胞的上清液和細胞裂解液進行PBMC刺激試驗,以MTT法檢測其促細胞增殖效應.結果顯示,成功構建Survivin啟動子調控的真覈錶達質粒pGL-S-SEA.重組質粒在A549細胞中啟動瞭sea基因的錶達,其轉錄彊度為內參(GADPH基因)的65.96%,在對照MRC-5細胞中無明顯錶達.該質粒轉化A549細胞的裂解液具有促進人PBMC增殖活性、上清液無明顯促PBMC增殖作用,裂解液組、上清液組和PHA暘性對照組的刺激指數分彆為1.29、0.95和1.58.結論成功構建pGL-S-SEA質粒,其在A549細胞的錶達產物具有誘導人PBMC增殖的超抗原活性,為下一步將其作為基因疫苗治療肺癌奠定瞭基礎.
구건Survivin계동자조공적포도구균장독소A(SEA)적진핵표체질립,검측기재인폐선암A549세포중적특이성표체이급표체산물적초항원활성.이PCR법확증sea기인,이함유Survivin계동자위조공서렬적pGL-S-RED질립위기출,구건pGL-S-SEA진핵표체질립.용지질체전염A549세포,이RT-PCR법검측sea기인표체수평.제비건강헌혈자PBMC,용pGL-S-SEA질립전염A549세포적상청액화세포렬해액진행PBMC자격시험,이MTT법검측기촉세포증식효응.결과현시,성공구건Survivin계동자조공적진핵표체질립pGL-S-SEA.중조질립재A549세포중계동료sea기인적표체,기전록강도위내삼(GADPH기인)적65.96%,재대조MRC-5세포중무명현표체.해질립전화A549세포적렬해액구유촉진인PBMC증식활성、상청액무명현촉PBMC증식작용,렬해액조、상청액조화PHA양성대조조적자격지수분별위1.29、0.95화1.58.결론성공구건pGL-S-SEA질립,기재A549세포적표체산물구유유도인PBMC증식적초항원활성,위하일보장기작위기인역묘치료폐암전정료기출.
