中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2011年
1期
1-7
,共7页
周勇%曾令兵%范玉顶%罗晓松%徐进%肖艺
週勇%曾令兵%範玉頂%囉曉鬆%徐進%肖藝
주용%증령병%범옥정%라효송%서진%초예
草鱼出血病%呼肠孤病毒%VP6基因%LTB基因%植物表达载体
草魚齣血病%呼腸孤病毒%VP6基因%LTB基因%植物錶達載體
초어출혈병%호장고병독%VP6기인%LTB기인%식물표체재체
根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,,CCRV)VP6蛋白的全基因序列(AF403394)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的基因序列(M17874),设计并合成特异性引物,从感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)09草鱼(Ctenopharyngodon idellus),肾细胞(CIK)中提取病毒核酸作为模板,进行RT-FCR扩增,得到约1.3 kb的GCRV VP6基因读码框片段,同时提取大肠杆菌(Escherichia coli)H44815全基因组作为模板,进行FCR扩增得到约370 bp的LTB基因读码框片段.将获得的2个目的片段分别克隆到pCR2.1载体上,经酶切、PCR扩增检测和序列测定确认后,将其克隆到携带绿色荧光蛋白标记的植物表达载体pCAMBIA1302上,成功构建了可将草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白、大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(ETB)、绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的植物载体pCAMBIA1302-LTB-VP6.本研究旨为草鱼出血病可饲化转基因植物疫苗研制奠定基础.
根據GenBank中草魚呼腸孤病毒(Grass Carp Reovirus,,CCRV)VP6蛋白的全基因序列(AF403394)和大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)的基因序列(M17874),設計併閤成特異性引物,從感染草魚呼腸孤病毒(GCRV)09草魚(Ctenopharyngodon idellus),腎細胞(CIK)中提取病毒覈痠作為模闆,進行RT-FCR擴增,得到約1.3 kb的GCRV VP6基因讀碼框片段,同時提取大腸桿菌(Escherichia coli)H44815全基因組作為模闆,進行FCR擴增得到約370 bp的LTB基因讀碼框片段.將穫得的2箇目的片段分彆剋隆到pCR2.1載體上,經酶切、PCR擴增檢測和序列測定確認後,將其剋隆到攜帶綠色熒光蛋白標記的植物錶達載體pCAMBIA1302上,成功構建瞭可將草魚呼腸孤病毒VP6蛋白、大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(ETB)、綠色熒光蛋白(GFP)融閤錶達的植物載體pCAMBIA1302-LTB-VP6.本研究旨為草魚齣血病可飼化轉基因植物疫苗研製奠定基礎.
근거GenBank중초어호장고병독(Grass Carp Reovirus,,CCRV)VP6단백적전기인서렬(AF403394)화대장간균불내열장독소B아단위(LTB)적기인서렬(M17874),설계병합성특이성인물,종감염초어호장고병독(GCRV)09초어(Ctenopharyngodon idellus),신세포(CIK)중제취병독핵산작위모판,진행RT-FCR확증,득도약1.3 kb적GCRV VP6기인독마광편단,동시제취대장간균(Escherichia coli)H44815전기인조작위모판,진행FCR확증득도약370 bp적LTB기인독마광편단.장획득적2개목적편단분별극륭도pCR2.1재체상,경매절、PCR확증검측화서렬측정학인후,장기극륭도휴대록색형광단백표기적식물표체재체pCAMBIA1302상,성공구건료가장초어호장고병독VP6단백、대장간균불내열장독소B아단위(ETB)、록색형광단백(GFP)융합표체적식물재체pCAMBIA1302-LTB-VP6.본연구지위초어출혈병가사화전기인식물역묘연제전정기출.
