中国海洋大学学报（自然科学版）
中國海洋大學學報（自然科學版）
중국해양대학학보（자연과학판）
PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSITY OF CHINA
2011年
7期
101-106
,共6页
鳗弧菌%MltD蛋白%原核表达%纯化%生物信息学分析
鰻弧菌%MltD蛋白%原覈錶達%純化%生物信息學分析
만호균%MltD단백%원핵표체%순화%생물신식학분석
本研究将新发现的鳗弧菌毒力相关基因mltD(膜绑定溶胞壁质转糖酶基因)克隆于表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以镍琼脂糖亲和层析柱纯化表达的融合蛋白；经SDS-PAGE分析,纯化的融合蛋白为单一条带,分子量约为70.2 kDa,与理论预测值相符.生物信息学分析表明,鳗弧菌MltD由523个氨基酸组成,与其他弧菌的MltD氨基酸序列有较高的相似性；二级结构以a螺旋和无规则卷曲为主；功能区包括N端的信号肽区域、1个糖基转移酶结构域和C端的3个溶解酶结构域；蛋白的N端具有一段脂蛋白信号肽,信号肽外的其他部分为非细胞质蛋白.鳗弧菌MltD蛋白为亲水性；不稳定系数为27.40,属于稳定性蛋白；整个蛋白分子共有24个可能的抗原决定簇,具有较强的抗原性.推断MltD蛋白为1种外周膜脂蛋白,在弧菌中相对保守,抗原性强,可应用于抗弧菌病疫苗的开发研制.
本研究將新髮現的鰻弧菌毒力相關基因mltD(膜綁定溶胞壁質轉糖酶基因)剋隆于錶達載體pET-32a(+),在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,併以鎳瓊脂糖親和層析柱純化錶達的融閤蛋白；經SDS-PAGE分析,純化的融閤蛋白為單一條帶,分子量約為70.2 kDa,與理論預測值相符.生物信息學分析錶明,鰻弧菌MltD由523箇氨基痠組成,與其他弧菌的MltD氨基痠序列有較高的相似性；二級結構以a螺鏇和無規則捲麯為主；功能區包括N耑的信號肽區域、1箇糖基轉移酶結構域和C耑的3箇溶解酶結構域；蛋白的N耑具有一段脂蛋白信號肽,信號肽外的其他部分為非細胞質蛋白.鰻弧菌MltD蛋白為親水性；不穩定繫數為27.40,屬于穩定性蛋白；整箇蛋白分子共有24箇可能的抗原決定簇,具有較彊的抗原性.推斷MltD蛋白為1種外週膜脂蛋白,在弧菌中相對保守,抗原性彊,可應用于抗弧菌病疫苗的開髮研製.
본연구장신발현적만호균독력상관기인mltD(막방정용포벽질전당매기인)극륭우표체재체pET-32a(+),재대장간균BL21(DE3)중유도표체,병이얼경지당친화층석주순화표체적융합단백；경SDS-PAGE분석,순화적융합단백위단일조대,분자량약위70.2 kDa,여이론예측치상부.생물신식학분석표명,만호균MltD유523개안기산조성,여기타호균적MltD안기산서렬유교고적상사성；이급결구이a라선화무규칙권곡위주；공능구포괄N단적신호태구역、1개당기전이매결구역화C단적3개용해매결구역；단백적N단구유일단지단백신호태,신호태외적기타부분위비세포질단백.만호균MltD단백위친수성；불은정계수위27.40,속우은정성단백；정개단백분자공유24개가능적항원결정족,구유교강적항원성.추단MltD단백위1충외주막지단백,재호균중상대보수,항원성강,가응용우항호균병역묘적개발연제.
