中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2011年
15期
4324-4330
,共7页
张影%綦盛麟%程宁%张勇
張影%綦盛麟%程寧%張勇
장영%기성린%정저%장용
经典的Wnt信号通路%卵圆细胞%增殖%自我更新
經典的Wnt信號通路%卵圓細胞%增殖%自我更新
경전적Wnt신호통로%란원세포%증식%자아경신
目的 探讨激活经典的Wnt信号转导通路在大鼠肝脏卵圆细胞增殖、分化中的作用.方法 不同浓度的重组Wnt3a纯化蛋白(20,40,80,160,200 ng/ml)在无血清培养条件下作用WB-F344细胞24 h,Brdu掺入法检测细胞增殖情况.160 ng/ml重组Wnt3a纯化蛋白在无血清条件下作用WB-F344细胞,作用24 h后通过免疫荧光观察β-catenin亚细胞定位的变化,Western-blot观察β-catenin蛋白表达的变化;半定量RT-PCR观察下游靶基因CyclinDl mRNA表达的变化.作用72 h后通过RT-PCR观察CK-19,AFP,ALB,HNF-6,HNF-4αmRNA表达的变化,Western-blot观察CK-19,AFP蛋白表达的变化.以同期未做处理的WB-F344细胞作为空白对照.结果 不同浓度的重组Wnt3a纯化蛋白作用后,处理组WB-F344细胞以剂量依赖方式增殖,Wnt3a处理组明显高于空白对照组(P<0.05),160 ng/ml作用时,增殖达到最高峰.Wnt3a(160 ng/m1)作用24 h后,通过免疫荧光共聚焦观察β-catenin的亚细胞定位发现,处理组β-catenin在WB-F344主要在细胞核中表达;而未处理组主要在核周表达;Western-blot发现处理组β-catenin蛋白表达轻度增加;半定量RT-PCR发现下游靶基因CyclinDl mRNA的表达显著增加(P<0.01).72 h后,RT-PCR发现两组中均有AFP,CK-19,HNF-6,HNF4-α基因表达,而ALB在两组中均不表达;同时通过Western-blot发现AFP,CK-19蛋白在两组中均有表达.结论 激活经典的Wnt信号转导通路促进大鼠肝脏卵圆细胞系WB-F344的增殖和自我更新.
目的 探討激活經典的Wnt信號轉導通路在大鼠肝髒卵圓細胞增殖、分化中的作用.方法 不同濃度的重組Wnt3a純化蛋白(20,40,80,160,200 ng/ml)在無血清培養條件下作用WB-F344細胞24 h,Brdu摻入法檢測細胞增殖情況.160 ng/ml重組Wnt3a純化蛋白在無血清條件下作用WB-F344細胞,作用24 h後通過免疫熒光觀察β-catenin亞細胞定位的變化,Western-blot觀察β-catenin蛋白錶達的變化;半定量RT-PCR觀察下遊靶基因CyclinDl mRNA錶達的變化.作用72 h後通過RT-PCR觀察CK-19,AFP,ALB,HNF-6,HNF-4αmRNA錶達的變化,Western-blot觀察CK-19,AFP蛋白錶達的變化.以同期未做處理的WB-F344細胞作為空白對照.結果 不同濃度的重組Wnt3a純化蛋白作用後,處理組WB-F344細胞以劑量依賴方式增殖,Wnt3a處理組明顯高于空白對照組(P<0.05),160 ng/ml作用時,增殖達到最高峰.Wnt3a(160 ng/m1)作用24 h後,通過免疫熒光共聚焦觀察β-catenin的亞細胞定位髮現,處理組β-catenin在WB-F344主要在細胞覈中錶達;而未處理組主要在覈週錶達;Western-blot髮現處理組β-catenin蛋白錶達輕度增加;半定量RT-PCR髮現下遊靶基因CyclinDl mRNA的錶達顯著增加(P<0.01).72 h後,RT-PCR髮現兩組中均有AFP,CK-19,HNF-6,HNF4-α基因錶達,而ALB在兩組中均不錶達;同時通過Western-blot髮現AFP,CK-19蛋白在兩組中均有錶達.結論 激活經典的Wnt信號轉導通路促進大鼠肝髒卵圓細胞繫WB-F344的增殖和自我更新.
목적 탐토격활경전적Wnt신호전도통로재대서간장란원세포증식、분화중적작용.방법 불동농도적중조Wnt3a순화단백(20,40,80,160,200 ng/ml)재무혈청배양조건하작용WB-F344세포24 h,Brdu참입법검측세포증식정황.160 ng/ml중조Wnt3a순화단백재무혈청조건하작용WB-F344세포,작용24 h후통과면역형광관찰β-catenin아세포정위적변화,Western-blot관찰β-catenin단백표체적변화;반정량RT-PCR관찰하유파기인CyclinDl mRNA표체적변화.작용72 h후통과RT-PCR관찰CK-19,AFP,ALB,HNF-6,HNF-4αmRNA표체적변화,Western-blot관찰CK-19,AFP단백표체적변화.이동기미주처리적WB-F344세포작위공백대조.결과 불동농도적중조Wnt3a순화단백작용후,처리조WB-F344세포이제량의뢰방식증식,Wnt3a처리조명현고우공백대조조(P<0.05),160 ng/ml작용시,증식체도최고봉.Wnt3a(160 ng/m1)작용24 h후,통과면역형광공취초관찰β-catenin적아세포정위발현,처리조β-catenin재WB-F344주요재세포핵중표체;이미처리조주요재핵주표체;Western-blot발현처리조β-catenin단백표체경도증가;반정량RT-PCR발현하유파기인CyclinDl mRNA적표체현저증가(P<0.01).72 h후,RT-PCR발현량조중균유AFP,CK-19,HNF-6,HNF4-α기인표체,이ALB재량조중균불표체;동시통과Western-blot발현AFP,CK-19단백재량조중균유표체.결론 격활경전적Wnt신호전도통로촉진대서간장란원세포계WB-F344적증식화자아경신.
