中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2007年
8期
601-604
,共4页
刘展%石泽亚%周会新%吴明浩%佘周军%李毅妮
劉展%石澤亞%週會新%吳明浩%佘週軍%李毅妮
류전%석택아%주회신%오명호%사주군%리의니
干细胞%肝细胞%细胞分化%脂肪间充质干细胞
榦細胞%肝細胞%細胞分化%脂肪間充質榦細胞
간세포%간세포%세포분화%지방간충질간세포
目的 探讨脂肪源性间充质干细胞(AMSC)向肝细胞横向分化的可能性.方法 胶原酶消化脂肪组织,贴壁培养,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志.取扩增3代的AMSC分为2组,诱导分化组在含有2%FBS的DMEM F12培养基中加入肝细胞生长因子20 ng/ml和成纤维细胞生长因子4 10ng/ml、1×ITS和地塞米松0.1μmol/L,培养14 d;空白对照组则不加任何细胞因子.RT-PCR检测诱导分化过程中肝细胞核因子1、GATA4等基因转录水平的变化.2周后,采用流式细胞术检测AFP和Alb阳性细胞在两组细胞中的比例,检测肝细胞特异性细胞角蛋白(CK)18、CK19的表达.结果 分离、培养的AMSC呈成纤维细胞样生长,可以稳定传代.流式细胞术检测结果显示第3代脂肪间充质干细胞高表达表面CD29、CD44;不表达CD34、CD45.RT-PCR检测诱导5、8、11、14 d的细胞,显示有肝细胞特异性转录因子GATA4和肝细胞核因子1A基因的表达,并随时间延长而逐渐增多.流式细胞术检测诱导14 d的细胞,发现30.0%的细胞表达Alb,17.8%细胞表达AFP,双阳性的细胞为6.9%;免疫荧光检测发现诱导细胞表达CK18、CK19.空白对照组脂肪间充质干细胞则未见上述各项变化.结论 在低血清培养体系中,采用细胞因子联合诱导,显示脂肪间充质细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞.
目的 探討脂肪源性間充質榦細胞(AMSC)嚮肝細胞橫嚮分化的可能性.方法 膠原酶消化脂肪組織,貼壁培養,體外擴增後以流式細胞儀鑒定其錶麵標誌.取擴增3代的AMSC分為2組,誘導分化組在含有2%FBS的DMEM F12培養基中加入肝細胞生長因子20 ng/ml和成纖維細胞生長因子4 10ng/ml、1×ITS和地塞米鬆0.1μmol/L,培養14 d;空白對照組則不加任何細胞因子.RT-PCR檢測誘導分化過程中肝細胞覈因子1、GATA4等基因轉錄水平的變化.2週後,採用流式細胞術檢測AFP和Alb暘性細胞在兩組細胞中的比例,檢測肝細胞特異性細胞角蛋白(CK)18、CK19的錶達.結果 分離、培養的AMSC呈成纖維細胞樣生長,可以穩定傳代.流式細胞術檢測結果顯示第3代脂肪間充質榦細胞高錶達錶麵CD29、CD44;不錶達CD34、CD45.RT-PCR檢測誘導5、8、11、14 d的細胞,顯示有肝細胞特異性轉錄因子GATA4和肝細胞覈因子1A基因的錶達,併隨時間延長而逐漸增多.流式細胞術檢測誘導14 d的細胞,髮現30.0%的細胞錶達Alb,17.8%細胞錶達AFP,雙暘性的細胞為6.9%;免疫熒光檢測髮現誘導細胞錶達CK18、CK19.空白對照組脂肪間充質榦細胞則未見上述各項變化.結論 在低血清培養體繫中,採用細胞因子聯閤誘導,顯示脂肪間充質細胞在體外能定嚮分化為肝細胞樣細胞.
목적 탐토지방원성간충질간세포(AMSC)향간세포횡향분화적가능성.방법 효원매소화지방조직,첩벽배양,체외확증후이류식세포의감정기표면표지.취확증3대적AMSC분위2조,유도분화조재함유2%FBS적DMEM F12배양기중가입간세포생장인자20 ng/ml화성섬유세포생장인자4 10ng/ml、1×ITS화지새미송0.1μmol/L,배양14 d;공백대조조칙불가임하세포인자.RT-PCR검측유도분화과정중간세포핵인자1、GATA4등기인전록수평적변화.2주후,채용류식세포술검측AFP화Alb양성세포재량조세포중적비례,검측간세포특이성세포각단백(CK)18、CK19적표체.결과 분리、배양적AMSC정성섬유세포양생장,가이은정전대.류식세포술검측결과현시제3대지방간충질간세포고표체표면CD29、CD44;불표체CD34、CD45.RT-PCR검측유도5、8、11、14 d적세포,현시유간세포특이성전록인자GATA4화간세포핵인자1A기인적표체,병수시간연장이축점증다.류식세포술검측유도14 d적세포,발현30.0%적세포표체Alb,17.8%세포표체AFP,쌍양성적세포위6.9%;면역형광검측발현유도세포표체CK18、CK19.공백대조조지방간충질간세포칙미견상술각항변화.결론 재저혈청배양체계중,채용세포인자연합유도,현시지방간충질세포재체외능정향분화위간세포양세포.
