CAJ | 학술논문

目的纯化副溶血性弧菌直接溶血相关毒素(TRH)蛋白,鉴定表达产物的生物学活性和免疫原性,为构建副溶血性弧菌快速检测方法奠定物质基础.方法构建trh基因的原核融合表达系统PRⅡ(trh/pGEX-3X/DE3),在31℃条件下0.6 mmol/L IPTG诱导表达.用SDS-PAGE分析蛋白表达,溶血试验检测表达蛋白的溶血活性.将表达产物皮下注射免疫兔,溶血抑制实验检测该抗体体外对TRH溶血活性的抑制作用.结果 PRⅡ在上述条件下诱导后,TRH呈可溶性、融合性表达.溶血试验表明,表达的蛋白具有溶血活性.用表达的蛋白免疫兔产生的相应抗体,在体外具有抑制TRH溶血活性的作用.结论 trh基因在原核融合表达系统pGEX-3X/DE3中获得成功表达,并得到纯度较高的TRH蛋白,为基因工程大规模制备高纯度TRH抗原、制备抗TRH的多克隆和(或)单克隆抗体、构建基因工程菌苗、阐明该菌的致病机制奠定了基础.
목적순화부용혈성호균직접용혈상관독소(TRH)단백,감정표체산물적생물학활성화면역원성,위구건부용혈성호균쾌속검측방법전정물질기출.방법구건trh기인적원핵융합표체계통PRⅡ(trh/pGEX-3X/DE3),재31℃조건하0.6 mmol/L IPTG유도표체.용SDS-PAGE분석단백표체,용혈시험검측표체단백적용혈활성.장표체산물피하주사면역토,용혈억제실험검측해항체체외대TRH용혈활성적억제작용.결과 PRⅡ재상술조건하유도후,TRH정가용성、융합성표체.용혈시험표명,표체적단백구유용혈활성.용표체적단백면역토산생적상응항체,재체외구유억제TRH용혈활성적작용.결론 trh기인재원핵융합표체계통pGEX-3X/DE3중획득성공표체,병득도순도교고적TRH단백,위기인공정대규모제비고순도TRH항원、제비항TRH적다극륭화(혹)단극륭항체、구건기인공정균묘、천명해균적치병궤제전정료기출.