生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2004年
1期
36-40
,共5页
曹廷兵%叶治家%巩燕%彭家和%江渝
曹廷兵%葉治傢%鞏燕%彭傢和%江渝
조정병%협치가%공연%팽가화%강투
PPARγ%PPARγ-LBD%克隆%表达
PPARγ%PPARγ-LBD%剋隆%錶達
PPARγ%PPARγ-LBD%극륭%표체
从正常中国人的面部脂肪组织分离总RNA,采用RT-PCR获得人的PPARγ-LBD cDNA,然后克隆至原核表达载体pET28a,构建高效原核表达质粒pET28a-PPARγ-LBD,序列分析表明正常中国人的PPARy-LBDcDNA序列与Gene Bank报道的序列一致.把构建的pET28a-PPARy-LBD质粒转化大肠杆菌BL2l(DE3),IPTG进行诱导表达,Westem blot检测表达产物,在相对分子质量34 kDa处有特异的蛋白表达条带,表达蛋白以可溶性和包涵体方式存在.在N末端融合6×His纯化标签的表达产物用Ni2+ -NTA离子交换树脂进行纯化,纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析大于90%以上.因此,获得了正常中国人的PPARγ-LBD cDNA序列,并且在E coli中成功表达和纯化了PPARγ-LBD蛋白.
從正常中國人的麵部脂肪組織分離總RNA,採用RT-PCR穫得人的PPARγ-LBD cDNA,然後剋隆至原覈錶達載體pET28a,構建高效原覈錶達質粒pET28a-PPARγ-LBD,序列分析錶明正常中國人的PPARy-LBDcDNA序列與Gene Bank報道的序列一緻.把構建的pET28a-PPARy-LBD質粒轉化大腸桿菌BL2l(DE3),IPTG進行誘導錶達,Westem blot檢測錶達產物,在相對分子質量34 kDa處有特異的蛋白錶達條帶,錶達蛋白以可溶性和包涵體方式存在.在N末耑融閤6×His純化標籤的錶達產物用Ni2+ -NTA離子交換樹脂進行純化,純化蛋白進行SDS-PAGE純度分析大于90%以上.因此,穫得瞭正常中國人的PPARγ-LBD cDNA序列,併且在E coli中成功錶達和純化瞭PPARγ-LBD蛋白.
종정상중국인적면부지방조직분리총RNA,채용RT-PCR획득인적PPARγ-LBD cDNA,연후극륭지원핵표체재체pET28a,구건고효원핵표체질립pET28a-PPARγ-LBD,서렬분석표명정상중국인적PPARy-LBDcDNA서렬여Gene Bank보도적서렬일치.파구건적pET28a-PPARy-LBD질립전화대장간균BL2l(DE3),IPTG진행유도표체,Westem blot검측표체산물,재상대분자질량34 kDa처유특이적단백표체조대,표체단백이가용성화포함체방식존재.재N말단융합6×His순화표첨적표체산물용Ni2+ -NTA리자교환수지진행순화,순화단백진행SDS-PAGE순도분석대우90%이상.인차,획득료정상중국인적PPARγ-LBD cDNA서렬,병차재E coli중성공표체화순화료PPARγ-LBD단백.
