农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2006年
4期
555-558
,共4页
张科%吴家和%陈晓英%殷奎德%方荣祥%田颖川
張科%吳傢和%陳曉英%慇奎德%方榮祥%田穎川
장과%오가화%진효영%은규덕%방영상%전영천
南瓜韧皮部特异启动子%马铃薯%GUS酶活力
南瓜韌皮部特異啟動子%馬鈴藷%GUS酶活力
남과인피부특이계동자%마령서%GUS매활력
以本实验室构建的重组南瓜(Cucurbita moschata)韧皮部特异启动子dENP构建了植物表达载体pBdENP.利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介导转化马铃薯(Solanum tuberosum)品种Favorita,经过抗生素筛选,共获得转pBdENP和对照pBI121的抗卡那霉素马铃薯再生植株106株.通过PCR初步筛查,筛选出65株为转基因阳性植株.通过Southern blot对部分植株进一步分析,确证外源gus基因已经插入到转基因马铃薯植株的基因组中,插入拷贝数在1个或2个以上.对这些转基因马铃薯植株进行GUS染色结果表明,dENP和CaMV35S启动子一样均能驱动gus基因的表达,前者仅在马铃薯的韧皮部内特异表达,而CaMV35S启动子驱动的gus基因为组成型性表达.GUS酶活力测定结果进一步表明dENP和CaMV35S启动子驱动gus基因表达水平没有明显区别.以上结果证明dENP启动子驱动的外源基因在马铃薯中也具有韧皮部特异而高效表达的特征,从而可用于马铃薯抗病、抗蚜虫转基因研究.
以本實驗室構建的重組南瓜(Cucurbita moschata)韌皮部特異啟動子dENP構建瞭植物錶達載體pBdENP.利用根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4介導轉化馬鈴藷(Solanum tuberosum)品種Favorita,經過抗生素篩選,共穫得轉pBdENP和對照pBI121的抗卡那黴素馬鈴藷再生植株106株.通過PCR初步篩查,篩選齣65株為轉基因暘性植株.通過Southern blot對部分植株進一步分析,確證外源gus基因已經插入到轉基因馬鈴藷植株的基因組中,插入拷貝數在1箇或2箇以上.對這些轉基因馬鈴藷植株進行GUS染色結果錶明,dENP和CaMV35S啟動子一樣均能驅動gus基因的錶達,前者僅在馬鈴藷的韌皮部內特異錶達,而CaMV35S啟動子驅動的gus基因為組成型性錶達.GUS酶活力測定結果進一步錶明dENP和CaMV35S啟動子驅動gus基因錶達水平沒有明顯區彆.以上結果證明dENP啟動子驅動的外源基因在馬鈴藷中也具有韌皮部特異而高效錶達的特徵,從而可用于馬鈴藷抗病、抗蚜蟲轉基因研究.
이본실험실구건적중조남과(Cucurbita moschata)인피부특이계동자dENP구건료식물표체재체pBdENP.이용근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)LBA44O4개도전화마령서(Solanum tuberosum)품충Favorita,경과항생소사선,공획득전pBdENP화대조pBI121적항잡나매소마령서재생식주106주.통과PCR초보사사,사선출65주위전기인양성식주.통과Southern blot대부분식주진일보분석,학증외원gus기인이경삽입도전기인마령서식주적기인조중,삽입고패수재1개혹2개이상.대저사전기인마령서식주진행GUS염색결과표명,dENP화CaMV35S계동자일양균능구동gus기인적표체,전자부재마령서적인피부내특이표체,이CaMV35S계동자구동적gus기인위조성형성표체.GUS매활력측정결과진일보표명dENP화CaMV35S계동자구동gus기인표체수평몰유명현구별.이상결과증명dENP계동자구동적외원기인재마령서중야구유인피부특이이고효표체적특정,종이가용우마령서항병、항아충전기인연구.
