生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
3期
408-412
,共5页
吴芳明%黄火高%胡明%高月%刘永学
吳芳明%黃火高%鬍明%高月%劉永學
오방명%황화고%호명%고월%류영학
孤儿G蛋白偶联受体%GPR81%组织分布%工程细胞株
孤兒G蛋白偶聯受體%GPR81%組織分佈%工程細胞株
고인G단백우련수체%GPR81%조직분포%공정세포주
采用PCR技术分别从人全血基因组DNA及引产胚胎肾组织cDNA中扩增得到gpr81的全长cDNA序列(1041bp),运用生物信息学手段绘制该基因的分子进化树,显示该基因的氨基酸序列与烟酸受体同源性最高;然后,采用RT-PCR法分析该基因表达的组织分布,组织表达谱显示该基因在多种组织均有表达,以心脏及肝脏组织为最高;利用分子克隆手段构建含6×组氨酸(His)标签蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/his-myc-A-gpr81,通过脂质体介导,将该重组质粒转染CHO-K1细胞,RTPCR证实该基因已整合入CHO-K1细胞的基因组中,Western-blot表明GPR81在CHO-GPR81工程细胞株中有表达.组织表达谱的检测和工程细胞株的建立为进一步研究该受体的生物学功能奠定了基础.
採用PCR技術分彆從人全血基因組DNA及引產胚胎腎組織cDNA中擴增得到gpr81的全長cDNA序列(1041bp),運用生物信息學手段繪製該基因的分子進化樹,顯示該基因的氨基痠序列與煙痠受體同源性最高;然後,採用RT-PCR法分析該基因錶達的組織分佈,組織錶達譜顯示該基因在多種組織均有錶達,以心髒及肝髒組織為最高;利用分子剋隆手段構建含6×組氨痠(His)標籤蛋白的真覈錶達載體pcDNA3.1(-)/his-myc-A-gpr81,通過脂質體介導,將該重組質粒轉染CHO-K1細胞,RTPCR證實該基因已整閤入CHO-K1細胞的基因組中,Western-blot錶明GPR81在CHO-GPR81工程細胞株中有錶達.組織錶達譜的檢測和工程細胞株的建立為進一步研究該受體的生物學功能奠定瞭基礎.
채용PCR기술분별종인전혈기인조DNA급인산배태신조직cDNA중확증득도gpr81적전장cDNA서렬(1041bp),운용생물신식학수단회제해기인적분자진화수,현시해기인적안기산서렬여연산수체동원성최고;연후,채용RT-PCR법분석해기인표체적조직분포,조직표체보현시해기인재다충조직균유표체,이심장급간장조직위최고;이용분자극륭수단구건함6×조안산(His)표첨단백적진핵표체재체pcDNA3.1(-)/his-myc-A-gpr81,통과지질체개도,장해중조질립전염CHO-K1세포,RTPCR증실해기인이정합입CHO-K1세포적기인조중,Western-blot표명GPR81재CHO-GPR81공정세포주중유표체.조직표체보적검측화공정세포주적건립위진일보연구해수체적생물학공능전정료기출.
