CAJ | 학술논문

采用RT-PCR扩增我国H5N1禽流感病毒NP基因,亚克隆于含有组氨酸标签的原核表达载体中,在大肠杆菌中高效表达.所表达的蛋白经Ni+亲和色谱法纯化,SDS-PAGE电泳分析其纯度达95%以上,Western-Blotting鉴定具有良好的免疫反应活性.利用纯化蛋白作为诊断用抗原,建立了禽流感的琼脂扩散诊断方法.所建立的诊断方法在对禽流感强阳性和弱阳性血清的检测中,均出现了致密而清晰的沉淀线,且沉淀线的亮度与所加入的重组抗原的量成正比;而对鸡新城疫、鸡传染性法式囊等8种禽疫病阳性血清和SPF鸡血清的检测中,无沉淀线出现且没有交叉反应;利用该方法对30份进出口送检样品进行检测,其结果与国内同类试剂盒相符性达100%.实验室和现地使用证明,利用纯化的重组NP抗原所建立的方法简便、可靠、易于标准化,可为我国禽流感的兽医诊断、流行病学普查和出入境检验检疫提供有力的保障.
채용RT-PCR확증아국H5N1금류감병독NP기인,아극륭우함유조안산표첨적원핵표체재체중,재대장간균중고효표체.소표체적단백경Ni+친화색보법순화,SDS-PAGE전영분석기순도체95%이상,Western-Blotting감정구유량호적면역반응활성.이용순화단백작위진단용항원,건립료금류감적경지확산진단방법.소건립적진단방법재대금류감강양성화약양성혈청적검측중,균출현료치밀이청석적침정선,차침정선적량도여소가입적중조항원적량성정비;이대계신성역、계전염성법식낭등8충금역병양성혈청화SPF계혈청적검측중,무침정선출현차몰유교차반응;이용해방법대30빈진출구송검양품진행검측,기결과여국내동류시제합상부성체100%.실험실화현지사용증명,이용순화적중조NP항원소건립적방법간편、가고、역우표준화,가위아국금류감적수의진단、류행병학보사화출입경검험검역제공유력적보장.