CAJ | 학술논문

目的:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T抗原的真核表达载体并进行鉴定.方法:采用酚-氯仿法从昆明小鼠肝细胞中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增H+/K+ATPase β亚基启动子,产物命名为HK.将PCR产物纯化回收后与pMT18-T载体相连,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含SV40T基因片段的质粒pLITAg中酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,并测序鉴定.结果:pcDNA3.1(-)/HKSV用Xba Ⅰ、BamH Ⅰ双酶切可得到1 kb H+/K+ATPase β亚基启动子,2.7 kb SV40T基因与5.4 kb pcDNA3.1(-)载体3条DNA条带.用Xba Ⅰ、Kpn Ⅰ双酶切电泳,可见到约3.7与5.4 kb的两条DNA条带;用BamH Ⅰ单酶切电泳,可见到2.7与6.4 kb的2条DNA条带;用EcoR Ⅰ单酶切,只见到约9.1 kb的1条DNA条带,酶切电泳结果均与设计一致.测序结果显示,H+/K+ATPase β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中.结论:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T基因的真核表达载体,为进一步转基因小鼠及胃癌动物模型的建立提供了稳定、可靠的分子工具.
목적:구건재위벽세포중특이성표체SV40T항원적진핵표체재체병진행감정.방법:채용분-록방법종곤명소서간세포중제취기인조DNA,취합매련식반응(PCR)확증H+/K+ATPase β아기계동자,산물명명위HK.장PCR산물순화회수후여pMT18-T재체상련,병장기극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(-),구건pcDNA3.1(-)/HK;종함SV40T기인편단적질립pLITAg중매절회수SV40T기인,여pcDNA3.1(-)/HK상련,구건위벽세포특이성표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV,병측서감정.결과:pcDNA3.1(-)/HKSV용Xba Ⅰ、BamH Ⅰ쌍매절가득도1 kb H+/K+ATPase β아기계동자,2.7 kb SV40T기인여5.4 kb pcDNA3.1(-)재체3조DNA조대.용Xba Ⅰ、Kpn Ⅰ쌍매절전영,가견도약3.7여5.4 kb적량조DNA조대;용BamH Ⅰ단매절전영,가견도2.7여6.4 kb적2조DNA조대;용EcoR Ⅰ단매절,지견도약9.1 kb적1조DNA조대,매절전영결과균여설계일치.측서결과현시,H+/K+ATPase β아기계동자여SV40T기인성공구건우pcDNA3.1(-)진핵표체재체중.결론:구건재위벽세포중특이성표체SV40T기인적진핵표체재체,위진일보전기인소서급위암동물모형적건립제공료은정、가고적분자공구.