海洋科学进展
海洋科學進展
해양과학진전
JOURNAL OF OCEANOGRAPHY OF HUANGHAI & BOHAI SEAS
2008年
1期
74-81
,共8页
丛柏林%韩光%黄晓航%刘胜浩%林学政%陈靖
叢柏林%韓光%黃曉航%劉勝浩%林學政%陳靖
총백림%한광%황효항%류성호%림학정%진정
抗菌肽%Hepcidin基因%大菱鲆%基因克隆%真核表达
抗菌肽%Hepcidin基因%大蔆鲆%基因剋隆%真覈錶達
항균태%Hepcidin기인%대릉평%기인극륭%진핵표체
Hepcidin是鱼类的一种重要的抗菌肽.通过比较GenBank中不同Hepcidin基因的同源相似性,设计出特异性的引物,以我国海水养殖大菱鲆(Scophthalmus maximus L)肝脏为模板利用RT-PCR 技术克隆获得了一条基因.使用生物信息学手段对该基因序列进行了比对和分析,证实这条基因为Hepcidin1 precursor基因,属于Hepcidin基因家族.通过设计引物在Hepcidin基因的5′和3′端分别引入EcoR I和NotⅠ酶切位点.经过双酶切后获得具有EcoR I和Not I酶切位点的Hepcidin成熟肽片段,并与同样使用该酶线性化的表达载体pPIC3.5K连接.构建了表达载体pPIC3.5K/Hepc1,并将其导入到酵母基因组中,完成了真核表达载体的构建,为Hepcidin的真核表达作了基础性的准备工作.
Hepcidin是魚類的一種重要的抗菌肽.通過比較GenBank中不同Hepcidin基因的同源相似性,設計齣特異性的引物,以我國海水養殖大蔆鲆(Scophthalmus maximus L)肝髒為模闆利用RT-PCR 技術剋隆穫得瞭一條基因.使用生物信息學手段對該基因序列進行瞭比對和分析,證實這條基因為Hepcidin1 precursor基因,屬于Hepcidin基因傢族.通過設計引物在Hepcidin基因的5′和3′耑分彆引入EcoR I和NotⅠ酶切位點.經過雙酶切後穫得具有EcoR I和Not I酶切位點的Hepcidin成熟肽片段,併與同樣使用該酶線性化的錶達載體pPIC3.5K連接.構建瞭錶達載體pPIC3.5K/Hepc1,併將其導入到酵母基因組中,完成瞭真覈錶達載體的構建,為Hepcidin的真覈錶達作瞭基礎性的準備工作.
Hepcidin시어류적일충중요적항균태.통과비교GenBank중불동Hepcidin기인적동원상사성,설계출특이성적인물,이아국해수양식대릉평(Scophthalmus maximus L)간장위모판이용RT-PCR 기술극륭획득료일조기인.사용생물신식학수단대해기인서렬진행료비대화분석,증실저조기인위Hepcidin1 precursor기인,속우Hepcidin기인가족.통과설계인물재Hepcidin기인적5′화3′단분별인입EcoR I화NotⅠ매절위점.경과쌍매절후획득구유EcoR I화Not I매절위점적Hepcidin성숙태편단,병여동양사용해매선성화적표체재체pPIC3.5K련접.구건료표체재체pPIC3.5K/Hepc1,병장기도입도효모기인조중,완성료진핵표체재체적구건,위Hepcidin적진핵표체작료기출성적준비공작.
