CAJ | 학술논문

目的:研究聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(polybutylcyanoacrylate nanoparticles,PBCA-NPs,NPs)介导的端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对食管癌细胞EC9706生物活性的影响.方法:采用乳化聚合法制备聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒作为转染寡核苷酸(SODN)的载体.利用激光粒度分析仪和原子力显微镜测定制备NPs的粒径及zeta电位;以NPs介导8条不同hTERTASODN(NPs-ASODN Ⅰ、NPs-ASODN Ⅱ、NPs-ASODN Ⅲ、NPs-ASODN Ⅳ、NPs-ASODN Ⅴ、NPs-ASODN Ⅵ、NPs-ASODNⅦ和NPs-ASODN Ⅷ)转染食管癌细胞EC9706,采用MTT法检测转染后对EC9706细胞增殖的影响;采用RT-PCR检测hTERTmRNA表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:所制NPs粒径均匀、zeta电位较高,较为理想;以NPs介导hTERTASODN转染24h时,EC9706细胞增殖被明显抑制,该抑制作用随转染时间的延长和浓度的增高依次增强,与细胞对照组相比有显著差异(P＜0.05);且不同ASODN转染后对EC9706细胞抑制率不同.单纯NPs组、正义寡核苷酸NPs-SODN组和单纯ASODN组转染后对EC9706细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05).NPs-ASODN转染EC9706细胞72h时,hTERTmRNA表达水平明显降低,与细胞对照组相比有显著差异(P<0.05).NPs-ASODN转染72h时,NPs-ASODN Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ转染组EC9706细胞出现明显凋亡现象(P<0.05),而NPs-ASODNⅡ、Ⅲ、Ⅳ转染组EC9706细胞未发生明显的凋亡现象(P>0.05).结论:聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒可以作为一种良好的基因载体,在其介导下hTERTASODN能有效抑制食管癌细胞EC9706的增殖和hTERTmRNA的表达,并能诱导细胞凋亡.提示该纳米粒作为一种新型纳米栽体为食管癌的基因治疗提供了一条新的途径.这种抑制作用具有时间和浓度依赖性,并具有序列特异性,表明hTERT基因不同位点在端粒酶活性中所起的作用可能不同.
목적:연구취청기병희산정지납미립(polybutylcyanoacrylate nanoparticles,PBCA-NPs,NPs)개도적단립매역전록매(human telomerase reverse transeriptase,hTERT)기인반의과핵감산(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)대식관암세포EC9706생물활성적영향.방법:채용유화취합법제비취청기병희산정지납미립작위전염과핵감산(SODN)적재체.이용격광립도분석의화원자력현미경측정제비NPs적립경급zeta전위;이NPs개도8조불동hTERTASODN(NPs-ASODN Ⅰ、NPs-ASODN Ⅱ、NPs-ASODN Ⅲ、NPs-ASODN Ⅳ、NPs-ASODN Ⅴ、NPs-ASODN Ⅵ、NPs-ASODNⅦ화NPs-ASODN Ⅷ)전염식관암세포EC9706,채용MTT법검측전염후대EC9706세포증식적영향;채용RT-PCR검측hTERTmRNA표체정황;류식세포술검측세포조망솔.결과:소제NPs립경균균、zeta전위교고,교위이상;이NPs개도hTERTASODN전염24h시,EC9706세포증식피명현억제,해억제작용수전염시간적연장화농도적증고의차증강,여세포대조조상비유현저차이(P＜0.05);차불동ASODN전염후대EC9706세포억제솔불동.단순NPs조、정의과핵감산NPs-SODN조화단순ASODN조전염후대EC9706세포증식무명현억제작용(P>0.05).NPs-ASODN전염EC9706세포72h시,hTERTmRNA표체수평명현강저,여세포대조조상비유현저차이(P<0.05).NPs-ASODN전염72h시,NPs-ASODN Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ전염조EC9706세포출현명현조망현상(P<0.05),이NPs-ASODNⅡ、Ⅲ、Ⅳ전염조EC9706세포미발생명현적조망현상(P>0.05).결론:취청기병희산정지납미립가이작위일충량호적기인재체,재기개도하hTERTASODN능유효억제식관암세포EC9706적증식화hTERTmRNA적표체,병능유도세포조망.제시해납미립작위일충신형납미재체위식관암적기인치료제공료일조신적도경.저충억제작용구유시간화농도의뢰성,병구유서렬특이성,표명hTERT기인불동위점재단립매활성중소기적작용가능불동.