南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
6期
1111-1114,1118
,共5页
李刚%李湘平%姜立%鲁娟%刘雄%陈顺金
李剛%李湘平%薑立%魯娟%劉雄%陳順金
리강%리상평%강립%로연%류웅%진순금
鼻咽肿瘤%环氧合酶-2%shRNAmir%微小RNA%RNA干扰
鼻嚥腫瘤%環氧閤酶-2%shRNAmir%微小RNA%RNA榦擾
비인종류%배양합매-2%shRNAmir%미소RNA%RNA간우
目的 构建基于miR-155结构的shRNAmir慢病毒表达载体,在鼻咽癌细胞中沉默COX-2基因的表达,探索全新的COX-2抑制方法.方法 转染小干扰RNA(siRNA),筛选出沉默COX-2表达的RNA干扰序列,以该序列替换miR-155前体序列中的双链部分作为anti-COX-2 shRNAmir转录模板,构建pLVTHM/shRNAmir慢病毒质粒表达载体,利用293FT细胞包装pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒.感染鼻咽癌C666-1细胞后,通过流式分选,建立anti-COX-2 shRNAmir稳定表达,COX-2基因沉默的亚系.结果 设计合成的anti-COX-2a siRNA能够使COX-2 mRNA表达下降90%以上,根据其序列构建的plVTHM/sbRNLAmir质粒载体测序无误,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒感染C666-1细胞后,分选出亚系C666-1经反复传代仍可保持COX-2基因沉默的表型.结论 pLVTHM/shRNAmir慢病毒载体能够转录出基于miR-155结构的shRNAmir,沉默鼻咽癌细胞COX-2的表达,为探索更加高效安全的COX-2抑制剂奠定基础,也为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新手段.
目的 構建基于miR-155結構的shRNAmir慢病毒錶達載體,在鼻嚥癌細胞中沉默COX-2基因的錶達,探索全新的COX-2抑製方法.方法 轉染小榦擾RNA(siRNA),篩選齣沉默COX-2錶達的RNA榦擾序列,以該序列替換miR-155前體序列中的雙鏈部分作為anti-COX-2 shRNAmir轉錄模闆,構建pLVTHM/shRNAmir慢病毒質粒錶達載體,利用293FT細胞包裝pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒.感染鼻嚥癌C666-1細胞後,通過流式分選,建立anti-COX-2 shRNAmir穩定錶達,COX-2基因沉默的亞繫.結果 設計閤成的anti-COX-2a siRNA能夠使COX-2 mRNA錶達下降90%以上,根據其序列構建的plVTHM/sbRNLAmir質粒載體測序無誤,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir慢病毒感染C666-1細胞後,分選齣亞繫C666-1經反複傳代仍可保持COX-2基因沉默的錶型.結論 pLVTHM/shRNAmir慢病毒載體能夠轉錄齣基于miR-155結構的shRNAmir,沉默鼻嚥癌細胞COX-2的錶達,為探索更加高效安全的COX-2抑製劑奠定基礎,也為鼻嚥癌研究和抗腫瘤基因治療提供瞭新手段.
목적 구건기우miR-155결구적shRNAmir만병독표체재체,재비인암세포중침묵COX-2기인적표체,탐색전신적COX-2억제방법.방법 전염소간우RNA(siRNA),사선출침묵COX-2표체적RNA간우서렬,이해서렬체환miR-155전체서렬중적쌍련부분작위anti-COX-2 shRNAmir전록모판,구건pLVTHM/shRNAmir만병독질립표체재체,이용293FT세포포장pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir만병독.감염비인암C666-1세포후,통과류식분선,건립anti-COX-2 shRNAmir은정표체,COX-2기인침묵적아계.결과 설계합성적anti-COX-2a siRNA능구사COX-2 mRNA표체하강90%이상,근거기서렬구건적plVTHM/sbRNLAmir질립재체측서무오,pLVTHM/anti-COX-2 shRNAmir만병독감염C666-1세포후,분선출아계C666-1경반복전대잉가보지COX-2기인침묵적표형.결론 pLVTHM/shRNAmir만병독재체능구전록출기우miR-155결구적shRNAmir,침묵비인암세포COX-2적표체,위탐색경가고효안전적COX-2억제제전정기출,야위비인암연구화항종류기인치료제공료신수단.
