CAJ | 학술논문

背景:体内研究已经证实骨髓间充质干细胞能够像神经干细胞一样在脑内迁移和整合,如果骨髓间充质干细胞用于系统途径移植成为可能,将会显著简化移植的步骤.目的:构建含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的重组表达质粒pEGFP-N3-CD,用脂质体Lipofectamine2000转染大鼠骨髓间充质千细胞,体外观察CD基因的表达及BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞的杀伤作用.方法:构建pEGFP-N3-CD质粒,酶切、DNA测序鉴定.全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,脂质体Lipofectamine2000介导重组表达质粒pEGFP-N3-CD转染大鼠骨髓间充质干细胞,G418筛选培养获取阳性克隆(BMSCs-CD细胞),免疫细胞化学染色检测BMSCs-CD细胞的CD基因蛋白表达.Transwell小室共培养BMSCs-CD细胞和C6胶质瘤细胞,24 h后加入前体药物5-氟胞嘧啶,72 h后TUNEL、MTT、流式细胞术检测C6胶质瘤细胞的凋亡情况.结果与结论:构建的重组表达质粒pEGFP-N3-CD含完整的CD基因序列,CD基因转染至骨髓间充质干细胞并在基因及蛋白水平有完整表达.BMSCs-CD和C6胶质瘤细胞体外共培养条件下,C6胶质瘤的凋亡率呈剂量依赖性,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01).结果提示体外共培养条件下,BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞生长有显著的抑制作用.
배경:체내연구이경증실골수간충질간세포능구상신경간세포일양재뇌내천이화정합,여과골수간충질간세포용우계통도경이식성위가능,장회현저간화이식적보취.목적:구건함포밀정탈안매(CD)기인적중조표체질립pEGFP-N3-CD,용지질체Lipofectamine2000전염대서골수간충질천세포,체외관찰CD기인적표체급BMSCs-CD/5-불포밀정자살기인치료계통대C6효질류세포적살상작용.방법:구건pEGFP-N3-CD질립,매절、DNA측서감정.전골수첩벽법분리배양골수간충질간세포,지질체Lipofectamine2000개도중조표체질립pEGFP-N3-CD전염대서골수간충질간세포,G418사선배양획취양성극륭(BMSCs-CD세포),면역세포화학염색검측BMSCs-CD세포적CD기인단백표체.Transwell소실공배양BMSCs-CD세포화C6효질류세포,24 h후가입전체약물5-불포밀정,72 h후TUNEL、MTT、류식세포술검측C6효질류세포적조망정황.결과여결론:구건적중조표체질립pEGFP-N3-CD함완정적CD기인서렬,CD기인전염지골수간충질간세포병재기인급단백수평유완정표체.BMSCs-CD화C6효질류세포체외공배양조건하,C6효질류적조망솔정제량의뢰성,여대조조상비차이유현저성의의(P<0.01).결과제시체외공배양조건하,BMSCs-CD/5-불포밀정자살기인치료계통대C6효질류세포생장유현저적억제작용.