医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2010年
10期
30-33,136
,共5页
α2,3唾液酸转移酶Ⅰ%增强型绿色荧光蛋白%转染%表达
α2,3唾液痠轉移酶Ⅰ%增彊型綠色熒光蛋白%轉染%錶達
α2,3타액산전이매Ⅰ%증강형록색형광단백%전염%표체
目的 构建增强型绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ真核表达载体,分析其在人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达,筛选稳转细胞株,为进一步研究乳腺癌细胞膜连α2,3唾液酸与转移潜能调控提供细胞模型.方法 采用RT-PCR扩增ST3Gal Ⅰ全长基因片段,克隆至pEGFP-N1载体进行测序分析,用脂质体将重组真核表达载体pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ转染人乳腺癌细胞MCF-7中,经荧光显微镜观察及RT-PCR检测hST3Gal I的表达,G418抗性筛选稳转细胞株.结果 成功构建了真核表达载体pEGFP-N1- ST3Gal Ⅰ,体外转染MCF-7细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,半定量RT-PCR检出高水平表达的hST3Gal Ⅰ,获得稳转细胞株.结论 成功构建了增强型绿色荧光蛋白为报告基因的hST3Gal I真核表达载体,并在MCF-7中稳定表达, 为进一步研究乳腺癌细胞膜连α2,3唾液酸水平增高与其侵袭和转移潜能的调控提供实验基础.
目的 構建增彊型綠色熒光蛋白為報告基因的pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ真覈錶達載體,分析其在人乳腺癌細胞繫MCF-7中的錶達,篩選穩轉細胞株,為進一步研究乳腺癌細胞膜連α2,3唾液痠與轉移潛能調控提供細胞模型.方法 採用RT-PCR擴增ST3Gal Ⅰ全長基因片段,剋隆至pEGFP-N1載體進行測序分析,用脂質體將重組真覈錶達載體pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ轉染人乳腺癌細胞MCF-7中,經熒光顯微鏡觀察及RT-PCR檢測hST3Gal I的錶達,G418抗性篩選穩轉細胞株.結果 成功構建瞭真覈錶達載體pEGFP-N1- ST3Gal Ⅰ,體外轉染MCF-7細胞後,熒光顯微鏡下可見綠色熒光蛋白的錶達,半定量RT-PCR檢齣高水平錶達的hST3Gal Ⅰ,穫得穩轉細胞株.結論 成功構建瞭增彊型綠色熒光蛋白為報告基因的hST3Gal I真覈錶達載體,併在MCF-7中穩定錶達, 為進一步研究乳腺癌細胞膜連α2,3唾液痠水平增高與其侵襲和轉移潛能的調控提供實驗基礎.
목적 구건증강형록색형광단백위보고기인적pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ진핵표체재체,분석기재인유선암세포계MCF-7중적표체,사선은전세포주,위진일보연구유선암세포막련α2,3타액산여전이잠능조공제공세포모형.방법 채용RT-PCR확증ST3Gal Ⅰ전장기인편단,극륭지pEGFP-N1재체진행측서분석,용지질체장중조진핵표체재체pEGFP-N1-ST3Gal Ⅰ전염인유선암세포MCF-7중,경형광현미경관찰급RT-PCR검측hST3Gal I적표체,G418항성사선은전세포주.결과 성공구건료진핵표체재체pEGFP-N1- ST3Gal Ⅰ,체외전염MCF-7세포후,형광현미경하가견록색형광단백적표체,반정량RT-PCR검출고수평표체적hST3Gal Ⅰ,획득은전세포주.결론 성공구건료증강형록색형광단백위보고기인적hST3Gal I진핵표체재체,병재MCF-7중은정표체, 위진일보연구유선암세포막련α2,3타액산수평증고여기침습화전이잠능적조공제공실험기출.
