CAJ | 학술논문

目的研究结肠癌细胞SW480与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群对CoCl2模拟缺氧的反应性,及缺氧后抗凋亡、血管生成等相关基因mRNA水平表达的变化.方法 Westernblotting比较SW480经不同浓度、不同时间CoCl2模拟缺氧后缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的差异;免疫磁珠分选(MACS)CD133+SW480肿瘤干细胞亚群,流式细胞术检测其中CD133+细胞比例,选取稳定SW480细胞HIF-1α表达的最佳CoCl2浓度和时间作用后,Western blotting比较SW480细胞与CD133+SW480肿瘤干细胞亚群HIF-1α的表达差异;观察缺氧对肿瘤干细胞球形成和增殖能力的影响;实时定量PCR比较SW480经CoCl2模拟缺氧后结肠癌干细胞表面标志CD133(PROM1)、抗凋亡基因survivin、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平表达的差异.结果 SW480细胞经200 μmol/LCoCl2模拟缺氧8 h,HIF-1α表达量最高;经MACS分选所得CD133+SW480细胞中,CD133+细胞比例为85.56±0.89%;CD133+SW480亚群200 μmol/LCoCl2模拟缺氧8 h未见HIF-1α表达;CoCl2模拟缺氧培养后CD133+SW480肿瘤干细胞亚群无血清培养肿瘤干细胞球形成率较常规培养明显增强;SW480经CoCl2模拟缺氧其CD133、survivin、VEGF等mRNA表达分别升高1.607±0.103倍(P＜0.05)、2.745±0.370倍(P＜0.05)、3.798±0.091倍(P＜0.05).结论 (1)CoCl2能够在体外模拟结肠癌细胞缺氧,稳定HIF-1α的表达;(2)结肠癌细胞模拟缺氧后HIF-1α的表达与CoCl2呈浓度和时间依赖性;(3)CD133抗体标记免疫磁珠分选SW480细胞后,CD133+SW480细胞有较高得率和细胞活性;(4)缺氧可使肿瘤干细胞球形成能力增强,CD133+SW480肿瘤干细胞亚群较普通SW480更能够耐受缺氧,肿瘤干细胞具有不同于普通肿瘤细胞的特殊生物学特性;(5)缺氧可改变肿瘤细胞表型,促进其向肿瘤干细胞转化,并能够增强肿瘤抗凋亡能力和血管形成能力.
목적 연구결장암세포SW480여CD133+SW480종류간세포아군대CoCl2모의결양적반응성,급결양후항조망、혈관생성등상관기인mRNA수평표체적변화.방법 Westernblotting비교SW480경불동농도、불동시간CoCl2모의결양후결양유도인자1α(HIF-1α)표체적차이;면역자주분선(MACS)CD133+SW480종류간세포아군,류식세포술검측기중CD133+세포비례,선취은정SW480세포HIF-1α표체적최가CoCl2농도화시간작용후,Western blotting비교SW480세포여CD133+SW480종류간세포아군HIF-1α적표체차이;관찰결양대종류간세포구형성화증식능력적영향;실시정량PCR비교SW480경CoCl2모의결양후결장암간세포표면표지CD133(PROM1)、항조망기인survivin、혈관내피생장인자(VEGF)mRNA수평표체적차이.결과 SW480세포경200 μmol/LCoCl2모의결양8 h,HIF-1α표체량최고;경MACS분선소득CD133+SW480세포중,CD133+세포비례위85.56±0.89%;CD133+SW480아군200 μmol/LCoCl2모의결양8 h미견HIF-1α표체;CoCl2모의결양배양후CD133+SW480종류간세포아군무혈청배양종류간세포구형성솔교상규배양명현증강;SW480경CoCl2모의결양기CD133、survivin、VEGF등mRNA표체분별승고1.607±0.103배(P＜0.05)、2.745±0.370배(P＜0.05)、3.798±0.091배(P＜0.05).결론 (1)CoCl2능구재체외모의결장암세포결양,은정HIF-1α적표체;(2)결장암세포모의결양후HIF-1α적표체여CoCl2정농도화시간의뢰성;(3)CD133항체표기면역자주분선SW480세포후,CD133+SW480세포유교고득솔화세포활성;(4)결양가사종류간세포구형성능력증강,CD133+SW480종류간세포아군교보통SW480경능구내수결양,종류간세포구유불동우보통종류세포적특수생물학특성;(5)결양가개변종류세포표형,촉진기향종류간세포전화,병능구증강종류항조망능력화혈관형성능력.