中国食品学报
中國食品學報
중국식품학보
JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011年
5期
169-175
,共7页
李昊%翁惠玲%黄启龙%沈晓妙%高小尧%严晟旻%张志善%王浙峰%饶平凡
李昊%翁惠玲%黃啟龍%瀋曉妙%高小堯%嚴晟旻%張誌善%王浙峰%饒平凡
리호%옹혜령%황계룡%침효묘%고소요%엄성민%장지선%왕절봉%요평범
三聚氰胺%多克隆抗体%酶联免疫吸附%亲和层析%特异性
三聚氰胺%多剋隆抗體%酶聯免疫吸附%親和層析%特異性
삼취청알%다극륭항체%매련면역흡부%친화층석%특이성
目的:制备具有高特异性的三聚氰胺多克隆抗体,建立三聚氰胺快速检测方法.方法:通过抗原偶联嫁接技术,将不具备免疫原性的三聚氰胺与特定蛋白连接,制备免疫抗原(MB1st、MB2st、KM和ML2).对家兔进行皮下多点注射,初次免疫后取抗体血清,用SDS-PAGE检测血清中IgG的产生情况.采用酶联免疫吸附法测定各抗体血清的效价,最终以亲和层析法纯化血清,获得高特异性的抗体.将纯化后的抗体包被于酶标板上,建立三聚氰胺ELISA方法,并验证其有效性.结果:通过SDS-PAGE证明免疫前、后血清中IgG显著增长.进一步使用间接ELISA法测得各兔血清效价.MB1st免疫的效果最佳,其抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的36.97％上升至纯化后的75.57％.MB2st免疫的抗体血清对三聚氰胺的竞争率由纯化前的30.80％上升至纯化后92.43％.KM免疫的抗体血清效价较低,其对三聚氰胺的竞争率由纯化前的11.95％上升至纯化后的96.09％.ML2免疫效价低,且其抗体血清在纯化前、后均对三聚氰胺没有显著的竞争性.由此建立ELISA方法,并初步验证了该方法的有效性.结论:本试验中制备的三聚氰胺抗体血清.经分离、纯化后得到对三聚氰胺具有较高竞争性的多克隆抗体,为建立酶联免疫方法,以检测食品中三聚氰胺含量提供了理论基础.
目的:製備具有高特異性的三聚氰胺多剋隆抗體,建立三聚氰胺快速檢測方法.方法:通過抗原偶聯嫁接技術,將不具備免疫原性的三聚氰胺與特定蛋白連接,製備免疫抗原(MB1st、MB2st、KM和ML2).對傢兔進行皮下多點註射,初次免疫後取抗體血清,用SDS-PAGE檢測血清中IgG的產生情況.採用酶聯免疫吸附法測定各抗體血清的效價,最終以親和層析法純化血清,穫得高特異性的抗體.將純化後的抗體包被于酶標闆上,建立三聚氰胺ELISA方法,併驗證其有效性.結果:通過SDS-PAGE證明免疫前、後血清中IgG顯著增長.進一步使用間接ELISA法測得各兔血清效價.MB1st免疫的效果最佳,其抗體血清對三聚氰胺的競爭率由純化前的36.97％上升至純化後的75.57％.MB2st免疫的抗體血清對三聚氰胺的競爭率由純化前的30.80％上升至純化後92.43％.KM免疫的抗體血清效價較低,其對三聚氰胺的競爭率由純化前的11.95％上升至純化後的96.09％.ML2免疫效價低,且其抗體血清在純化前、後均對三聚氰胺沒有顯著的競爭性.由此建立ELISA方法,併初步驗證瞭該方法的有效性.結論:本試驗中製備的三聚氰胺抗體血清.經分離、純化後得到對三聚氰胺具有較高競爭性的多剋隆抗體,為建立酶聯免疫方法,以檢測食品中三聚氰胺含量提供瞭理論基礎.
목적:제비구유고특이성적삼취청알다극륭항체,건립삼취청알쾌속검측방법.방법:통과항원우련가접기술,장불구비면역원성적삼취청알여특정단백련접,제비면역항원(MB1st、MB2st、KM화ML2).대가토진행피하다점주사,초차면역후취항체혈청,용SDS-PAGE검측혈청중IgG적산생정황.채용매련면역흡부법측정각항체혈청적효개,최종이친화층석법순화혈청,획득고특이성적항체.장순화후적항체포피우매표판상,건립삼취청알ELISA방법,병험증기유효성.결과:통과SDS-PAGE증명면역전、후혈청중IgG현저증장.진일보사용간접ELISA법측득각토혈청효개.MB1st면역적효과최가,기항체혈청대삼취청알적경쟁솔유순화전적36.97％상승지순화후적75.57％.MB2st면역적항체혈청대삼취청알적경쟁솔유순화전적30.80％상승지순화후92.43％.KM면역적항체혈청효개교저,기대삼취청알적경쟁솔유순화전적11.95％상승지순화후적96.09％.ML2면역효개저,차기항체혈청재순화전、후균대삼취청알몰유현저적경쟁성.유차건립ELISA방법,병초보험증료해방법적유효성.결론:본시험중제비적삼취청알항체혈청.경분리、순화후득도대삼취청알구유교고경쟁성적다극륭항체,위건립매련면역방법,이검측식품중삼취청알함량제공료이론기출.
