南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
10期
1276-1279
,共4页
周松峰%廖文军%袁书智%覃绍敏%白安斌%吴健敏%陆芹章
週鬆峰%廖文軍%袁書智%覃紹敏%白安斌%吳健敏%陸芹章
주송봉%료문군%원서지%담소민%백안빈%오건민%륙근장
狂犬病病毒%Rmg基因%原核表达%纯化
狂犬病病毒%Rmg基因%原覈錶達%純化
광견병병독%Rmg기인%원핵표체%순화
[目的]对狂犬病毒Rmg因进行克隆、表达、纯化及复性,以期获得表达量高、反应原性好的Rmg蛋白,为研制快速、直观、简便检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条奠定基础.[方法]用常规PCR从狂犬病毒基因组中克隆出狂犬病毒G蛋白的主要抗原表位基因Rmg,并将其插入原核表达载体pET-Trx中,构建原核表达质粒pET-Trx-Rmg,将pETTrx-Rmg转化BL21 (DE3)plysS,在IPTG诱导下进行表达.[结果]SDS-PAGE分析结果表明,Rmg基因在BL21 (DE3)plysS中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的30.5％左右,并主要以不溶的包涵体形式存在,分子量约为51.7 kDa.将表达的蛋白以亲和层析法进行纯化并通过谷胱甘肽还原法进行复性,纯化后蛋白纯度达99.1％.经Western blotting检测,发现表达的Rmg蛋白能够与狂犬病毒高免血清发生特异反应,但与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)阳性血清不发生反应.[结论]Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研制检测狂犬病毒抗体的胶体金试纸条.
[目的]對狂犬病毒Rmg因進行剋隆、錶達、純化及複性,以期穫得錶達量高、反應原性好的Rmg蛋白,為研製快速、直觀、簡便檢測狂犬病毒抗體的膠體金試紙條奠定基礎.[方法]用常規PCR從狂犬病毒基因組中剋隆齣狂犬病毒G蛋白的主要抗原錶位基因Rmg,併將其插入原覈錶達載體pET-Trx中,構建原覈錶達質粒pET-Trx-Rmg,將pETTrx-Rmg轉化BL21 (DE3)plysS,在IPTG誘導下進行錶達.[結果]SDS-PAGE分析結果錶明,Rmg基因在BL21 (DE3)plysS中穫得高效錶達,錶達量佔菌體總蛋白的30.5％左右,併主要以不溶的包涵體形式存在,分子量約為51.7 kDa.將錶達的蛋白以親和層析法進行純化併通過穀胱甘肽還原法進行複性,純化後蛋白純度達99.1％.經Western blotting檢測,髮現錶達的Rmg蛋白能夠與狂犬病毒高免血清髮生特異反應,但與犬細小病毒(CPV)、犬瘟熱病毒(CDV)暘性血清不髮生反應.[結論]Rmg蛋白具有良好的抗原性,可用于研製檢測狂犬病毒抗體的膠體金試紙條.
[목적]대광견병독Rmg인진행극륭、표체、순화급복성,이기획득표체량고、반응원성호적Rmg단백,위연제쾌속、직관、간편검측광견병독항체적효체금시지조전정기출.[방법]용상규PCR종광견병독기인조중극륭출광견병독G단백적주요항원표위기인Rmg,병장기삽입원핵표체재체pET-Trx중,구건원핵표체질립pET-Trx-Rmg,장pETTrx-Rmg전화BL21 (DE3)plysS,재IPTG유도하진행표체.[결과]SDS-PAGE분석결과표명,Rmg기인재BL21 (DE3)plysS중획득고효표체,표체량점균체총단백적30.5％좌우,병주요이불용적포함체형식존재,분자량약위51.7 kDa.장표체적단백이친화층석법진행순화병통과곡광감태환원법진행복성,순화후단백순도체99.1％.경Western blotting검측,발현표체적Rmg단백능구여광견병독고면혈청발생특이반응,단여견세소병독(CPV)、견온열병독(CDV)양성혈청불발생반응.[결론]Rmg단백구유량호적항원성,가용우연제검측광견병독항체적효체금시지조.
