中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
10期
875-878
,共4页
KIR2DL4%HLA-G%受体识别
KIR2DL4%HLA-G%受體識彆
KIR2DL4%HLA-G%수체식별
目的 探讨HLA-G α1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用.方法 采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgGFc段的可溶性融合蛋白;利用"桥式"PCR和"点突变"方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met76和Gln79的密码子突变为Ala76,79(HLA-mG),通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAⅠ分子阴性的K562细胞上表达.流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Met76、Gln79残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用.结果 Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白.FACS结果表明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突变体在K562细胞上高表达.Met76、Gln79突变为Ala76,79后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别.结论 HLA-Gα1结构域中Met76和Gln79可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点.
目的 探討HLA-G α1結構域中特異的Met76和Gln79兩箇位點在HLA-G特異性受體KIR2DL4識彆中的作用.方法 採用真覈錶達載體CD51neg1,剋隆錶達KIR2DL4胞外區與IgGFc段的可溶性融閤蛋白;利用"橋式"PCR和"點突變"方法,將位于HLA-G目的基因α1結構域中編碼Met76和Gln79的密碼子突變為Ala76,79(HLA-mG),通過逆轉錄病毒錶達載體分彆使野生型HLA-G及其突變體在HLAⅠ分子陰性的K562細胞上錶達.流式細胞術分彆測定KIR2DL4-IgG Fc融閤蛋白與野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突變體結閤的熒光彊度,通過比較兩者的平均熒光彊度分析HLA-G分子Met76、Gln79殘基在HLA-G與其受體KIR2DL4識彆過程中的作用.結果 Western blot結果顯示,本實驗成功錶達KIR2DL4-IgG Fc融閤蛋白.FACS結果錶明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G突變體在K562細胞上高錶達.Met76、Gln79突變為Ala76,79後能顯著影響KIR2DL4對HLA-G分子的識彆.結論 HLA-Gα1結構域中Met76和Gln79可能是其特異性受體KIR2DL4識彆的關鍵位點.
목적 탐토HLA-G α1결구역중특이적Met76화Gln79량개위점재HLA-G특이성수체KIR2DL4식별중적작용.방법 채용진핵표체재체CD51neg1,극륭표체KIR2DL4포외구여IgGFc단적가용성융합단백;이용"교식"PCR화"점돌변"방법,장위우HLA-G목적기인α1결구역중편마Met76화Gln79적밀마자돌변위Ala76,79(HLA-mG),통과역전록병독표체재체분별사야생형HLA-G급기돌변체재HLAⅠ분자음성적K562세포상표체.류식세포술분별측정KIR2DL4-IgG Fc융합단백여야생형HLA-G급Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G돌변체결합적형광강도,통과비교량자적평균형광강도분석HLA-G분자Met76、Gln79잔기재HLA-G여기수체KIR2DL4식별과정중적작용.결과 Western blot결과현시,본실험성공표체KIR2DL4-IgG Fc융합단백.FACS결과표명,야생형HLA-G급Met76、Gln79→Ala76,79 HLA-G돌변체재K562세포상고표체.Met76、Gln79돌변위Ala76,79후능현저영향KIR2DL4대HLA-G분자적식별.결론 HLA-Gα1결구역중Met76화Gln79가능시기특이성수체KIR2DL4식별적관건위점.
