CAJ | 학술논문

[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非O1群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系.以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化.[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性.[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在:霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致.实验室间验证结果同实验一致.[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用.
[목적]연제일충공기층질병공제화구안검역단위일상역정감측사용적대수산품、식품、외배경수중적O1군、O139군화비O1군、비O139군곽란호균도가진행사검적실시형광PCR쾌속검측방법급기통용시제체계.이조기진행류행주적감정,분석외배경역정변화.[방법]침대곽란호균용혈소기인(hly)설계인물화탐침,취표준O1、O139、비O1비O139군곽란균충각10주,기타장도균충21주동시주형광PCR측시기특이성;용표준균주계렬희석민감도측시、실제양품희석염균민감도측시、실제양품불경증균직접검측저한실험、실제양품경과야배양증균검측저한실험등측시기민감성;통과일상실제양품대방법적응용화실험실간험증고찰기부합성.[결과]실험여대조균주51주지유곽란호균산생S형확증형광곡선,기타동원화비동원균주균미산생S형형광확증곡선,설계적인물탐침구유강특이성;통용곽란호균실시형광PCR시제체계직접검측염균양본적검측저한위103cfu/mL;대염균양본경과야배양증균검측저한분별재:곽란호균O1군위2.1cfu/g、곽란호균O139군위1.4cfu/g、곽란호균비O1비O139군위3.4cfu/g;실제양본검측252례양성검출정황여상규방법일치.실험실간험증결과동실험일치.[결론]연제적통용곽란호균실시형광PCR시제체계구유쾌속、준학、실용、민감성강적우점,치득재각검측부문추엄응용.