CAJ | 학술논문

目的:分离纯化大鼠胰岛,探索胰岛体外长期培养的新方法,为胰岛移植治疗糖尿病提供数量多、质量好的胰岛.方法:实验于2002-12/2004-03在哈尔滨医科大学组织工程与发育生物学研究室完成.①取16～22 d龄,体质量80 g的雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞.②采用改良的胰管内顺行灌注胶原酶消化体质量200～250 g的Wistar大鼠胰腺,Ficoll不连续浓度梯度纯化,手挑法检出全部胰岛,用双硫腙鉴定胰岛.③分为胰岛单独培养组和胰岛与支持细胞联合培养组,应用倒置显微镜和荧光显微镜观察单独培养组和联合培养组的胰岛形态和存活率,在培养的第3,7,14,28天用放射免疫法测定胰岛素分泌量,并通过胰岛素释放实验计算刺激指数.结果:①胰岛的回收率:回收率为53.6%,纯度为100%.②两组胰岛存活率的比较:联合培养组的胰岛存活率显著高于单独培养组[培养14 d:84%,3%;培养28 d:82%,0(P＜0.01)].③两组累积胰岛素分泌量及刺激指数比较:联合培养组胰岛素分泌量显著高于单独培养组[培养7 d:(105.0±11.6),(48.0±5.3)mIU/L(P＜0.01)],刺激指数也显著高于单独培养组(培养7 d:6.1±0.7,1.1±0.2)(P＜0.01).结论:通过胆总管顺行注入胶原酶进行消化,Ficoll不连续密度梯度离心法进行胰岛纯化,体视镜下手挑胰岛,胰岛的回收率和纯度较高.睾丸支持细胞与胰岛联合培养可以促进胰岛生长,显著延长存活时间,是一种较好的体外长期培养胰岛的方法.
목적:분리순화대서이도,탐색이도체외장기배양적신방법,위이도이식치료당뇨병제공수량다、질량호적이도.방법:실험우2002-12/2004-03재합이빈의과대학조직공정여발육생물학연구실완성.①취16～22 d령,체질량80 g적웅성Wistar대서고환지지세포.②채용개량적이관내순행관주효원매소화체질량200～250 g적Wistar대서이선,Ficoll불련속농도제도순화,수도법검출전부이도,용쌍류종감정이도.③분위이도단독배양조화이도여지지세포연합배양조,응용도치현미경화형광현미경관찰단독배양조화연합배양조적이도형태화존활솔,재배양적제3,7,14,28천용방사면역법측정이도소분비량,병통과이도소석방실험계산자격지수.결과:①이도적회수솔:회수솔위53.6%,순도위100%.②량조이도존활솔적비교:연합배양조적이도존활솔현저고우단독배양조[배양14 d:84%,3%;배양28 d:82%,0(P＜0.01)].③량조루적이도소분비량급자격지수비교:연합배양조이도소분비량현저고우단독배양조[배양7 d:(105.0±11.6),(48.0±5.3)mIU/L(P＜0.01)],자격지수야현저고우단독배양조(배양7 d:6.1±0.7,1.1±0.2)(P＜0.01).결론:통과담총관순행주입효원매진행소화,Ficoll불련속밀도제도리심법진행이도순화,체시경하수도이도,이도적회수솔화순도교고.고환지지세포여이도연합배양가이촉진이도생장,현저연장존활시간,시일충교호적체외장기배양이도적방법.