小鼠Ras激酶抑制剂(KSR)基因氨基端和羧基端真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
소서Ras격매억제제(KSR)기인안기단화최기단진핵표체재체적구건급기재293T세포중적표체
Construction of eukaryotic expression vectors of carboxyl terminus and amino terminus of kinase suppressor of Ras (KSR) and their expression in 293T cell line
  • 万方数据
    中国肺癌杂志 중국폐암잡지
    CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
    2006年 2期 123-126 ,共4页

    杨雪琴%周清华%朱文%朱大兴%马力%李昌林%王艳萍%陈小禾%马家宝

    양설금%주청화%주문%주대흥%마력%리창림%왕염평%진소화%마가보

    KSR%真核表达%基因重组 KSR%真覈錶達%基因重組
    KSR%진핵표체%기인중조
    背景与目的已有的实验证据表明,Ras激酶抑制剂(kinase suppressor of Ras,KSR)的功能主要是作为一个支架蛋白组装MAPK及其上游调控子形成多蛋白的复合体.但KSR是否存在激酶活性,一直是争论的焦点.本研究的目的是构建小鼠KSR基因氨基端(N-KSR)和羧基端(C-KSR)的真核表达载体,并观察其在293T细胞中的表达.方法通过PCR方法扩增N-KSR和C-KSR目的片段,利用基因重组技术构建pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体,并进行酶切和测序鉴定.鉴定正确的克隆瞬时转染293T细胞,通过Western blot方法检测目的蛋白的表达.结果通过酶切和测序鉴定,pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体序列正确,编码框正确.转染后的293T细胞经Western blot检测,能够表达目的蛋白.结论成功构建了pCMV-Tag2b-N-KSR和pCMV-Tag2b-C-KSR真核表达载体并可在293T细胞中表达,为以后的研究奠定了基础.
    배경여목적이유적실험증거표명,Ras격매억제제(kinase suppressor of Ras,KSR)적공능주요시작위일개지가단백조장MAPK급기상유조공자형성다단백적복합체.단KSR시부존재격매활성,일직시쟁론적초점.본연구적목적시구건소서KSR기인안기단(N-KSR)화최기단(C-KSR)적진핵표체재체,병관찰기재293T세포중적표체.방법통과PCR방법확증N-KSR화C-KSR목적편단,이용기인중조기술구건pCMV-Tag2b-N-KSR화pCMV-Tag2b-C-KSR진핵표체재체,병진행매절화측서감정.감정정학적극륭순시전염293T세포,통과Western blot방법검측목적단백적표체.결과통과매절화측서감정,pCMV-Tag2b-N-KSR화pCMV-Tag2b-C-KSR진핵표체재체서렬정학,편마광정학.전염후적293T세포경Western blot검측,능구표체목적단백.결론성공구건료pCMV-Tag2b-N-KSR화pCMV-Tag2b-C-KSR진핵표체재체병가재293T세포중표체,위이후적연구전정료기출.
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