山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2007年
2期
117-123
,共7页
黄圣运%张东升%张世周%刘桂军%赵跃然%王来成%刘义庆
黃聖運%張東升%張世週%劉桂軍%趙躍然%王來成%劉義慶
황골운%장동승%장세주%류계군%조약연%왕래성%류의경
胞嘧啶脱氨酶基因%胸腺嘧啶核苷激酶%内部核糖体进入位点%核酸内切酶%腺样囊性癌
胞嘧啶脫氨酶基因%胸腺嘧啶覈苷激酶%內部覈糖體進入位點%覈痠內切酶%腺樣囊性癌
포밀정탈안매기인%흉선밀정핵감격매%내부핵당체진입위점%핵산내절매%선양낭성암
目的:运用分子生物学技术扩增CD、TK基因,进行其DNA序列分析,并构建真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,将其共同转染ACC-2细胞,为进一步研究双自杀基因对ACC-2细胞杀伤作用奠定基础.方法:根据CD和TK基因DNA的序列分别设计、合成引物,构建克隆载体pMD18-T-CD和pMD18-T-TK,并进行DNA序列分析;构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的CD和TK基因的真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,用电穿孔法以真核表达质粒共同转染ACC-2细胞,用RT-PCR检测CD和TK的表达.结果:克隆DNA片段和GeneBank上报道的CD、TK序列基本一致,且经酶切鉴定,CD、TK基因成功插入真核表达质粒IRES,RT-PCR检测表明,以真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK共同转染的ACC-2细胞能表达CD和TK.结论:成功扩增了CD、TK的DNA片段,并进行了序列分析;成功构建CD和TK基因的重组真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,将其转染ACC-2细胞后能分泌性表达CD和TK,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径.
目的:運用分子生物學技術擴增CD、TK基因,進行其DNA序列分析,併構建真覈錶達質粒pIRES-CD及pIRES-TK,將其共同轉染ACC-2細胞,為進一步研究雙自殺基因對ACC-2細胞殺傷作用奠定基礎.方法:根據CD和TK基因DNA的序列分彆設計、閤成引物,構建剋隆載體pMD18-T-CD和pMD18-T-TK,併進行DNA序列分析;構建以內部覈糖體進入位點(IRES)相連的CD和TK基因的真覈錶達質粒pIRES-CD及pIRES-TK,用電穿孔法以真覈錶達質粒共同轉染ACC-2細胞,用RT-PCR檢測CD和TK的錶達.結果:剋隆DNA片段和GeneBank上報道的CD、TK序列基本一緻,且經酶切鑒定,CD、TK基因成功插入真覈錶達質粒IRES,RT-PCR檢測錶明,以真覈錶達質粒pIRES-CD及pIRES-TK共同轉染的ACC-2細胞能錶達CD和TK.結論:成功擴增瞭CD、TK的DNA片段,併進行瞭序列分析;成功構建CD和TK基因的重組真覈錶達質粒pIRES-CD及pIRES-TK,將其轉染ACC-2細胞後能分泌性錶達CD和TK,為腫瘤基因治療的研究提供一定途徑.
목적:운용분자생물학기술확증CD、TK기인,진행기DNA서렬분석,병구건진핵표체질립pIRES-CD급pIRES-TK,장기공동전염ACC-2세포,위진일보연구쌍자살기인대ACC-2세포살상작용전정기출.방법:근거CD화TK기인DNA적서렬분별설계、합성인물,구건극륭재체pMD18-T-CD화pMD18-T-TK,병진행DNA서렬분석;구건이내부핵당체진입위점(IRES)상련적CD화TK기인적진핵표체질립pIRES-CD급pIRES-TK,용전천공법이진핵표체질립공동전염ACC-2세포,용RT-PCR검측CD화TK적표체.결과:극륭DNA편단화GeneBank상보도적CD、TK서렬기본일치,차경매절감정,CD、TK기인성공삽입진핵표체질립IRES,RT-PCR검측표명,이진핵표체질립pIRES-CD급pIRES-TK공동전염적ACC-2세포능표체CD화TK.결론:성공확증료CD、TK적DNA편단,병진행료서렬분석;성공구건CD화TK기인적중조진핵표체질립pIRES-CD급pIRES-TK,장기전염ACC-2세포후능분비성표체CD화TK,위종류기인치료적연구제공일정도경.
