中华临床医师杂志（电子版）
中華臨床醫師雜誌（電子版）
중화림상의사잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF CLINICIANS(ELECTRONIC VERSION)
2008年
1期
79-85
,共7页
毕爱笑%丁元生%刘忠华%胡忠义
畢愛笑%丁元生%劉忠華%鬍忠義
필애소%정원생%류충화%호충의
分枝杆菌,结核%克隆,分子%基因表达%纯化
分枝桿菌,結覈%剋隆,分子%基因錶達%純化
분지간균,결핵%극륭,분자%기인표체%순화
目的 原核表达并纯化结核分枝杆菌Rv3872蛋白.方法 聚合酶链反应(PCR)技术从结核分枝杆菌标准株H37Rv全基因组中扩增出的表达Rv3872基因序列,将其克隆到pMD18-T载体后,测序分析.亚克隆该目的 基因到pET28a表达载体,最终转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后大量表达重组Rv3872蛋白,再经纯化、定量后,通过Western blot分析其抗原性.结果 扩增Rv3872基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致,表达蛋白经SDS-PAGE分析,在约15 000 kD处有表达条带,纯化后的重组蛋白占总蛋白的90%以上.免疫印迹分析显示重组的Rv3872蛋白具有抗原性.结论 成功表达结核分枝杆菌的Rv3872蛋白,为结核病血清学诊断候选抗原筛选和开发应用打下基础.
目的 原覈錶達併純化結覈分枝桿菌Rv3872蛋白.方法 聚閤酶鏈反應(PCR)技術從結覈分枝桿菌標準株H37Rv全基因組中擴增齣的錶達Rv3872基因序列,將其剋隆到pMD18-T載體後,測序分析.亞剋隆該目的 基因到pET28a錶達載體,最終轉化至大腸桿菌BL21(DE3),穫得正確的暘性剋隆子後大量錶達重組Rv3872蛋白,再經純化、定量後,通過Western blot分析其抗原性.結果 擴增Rv3872基因經序列測定與GenBank公佈的序列完全一緻,錶達蛋白經SDS-PAGE分析,在約15 000 kD處有錶達條帶,純化後的重組蛋白佔總蛋白的90%以上.免疫印跡分析顯示重組的Rv3872蛋白具有抗原性.結論 成功錶達結覈分枝桿菌的Rv3872蛋白,為結覈病血清學診斷候選抗原篩選和開髮應用打下基礎.
목적 원핵표체병순화결핵분지간균Rv3872단백.방법 취합매련반응(PCR)기술종결핵분지간균표준주H37Rv전기인조중확증출적표체Rv3872기인서렬,장기극륭도pMD18-T재체후,측서분석.아극륭해목적 기인도pET28a표체재체,최종전화지대장간균BL21(DE3),획득정학적양성극륭자후대량표체중조Rv3872단백,재경순화、정량후,통과Western blot분석기항원성.결과 확증Rv3872기인경서렬측정여GenBank공포적서렬완전일치,표체단백경SDS-PAGE분석,재약15 000 kD처유표체조대,순화후적중조단백점총단백적90%이상.면역인적분석현시중조적Rv3872단백구유항원성.결론 성공표체결핵분지간균적Rv3872단백,위결핵병혈청학진단후선항원사선화개발응용타하기출.
