CAJ | 학술논문

目的:骨髓中包含的间质前体细胞在适宜的条件下可以被许多细胞因子诱导分化为软骨.采用基因转染技术观察转化生长因子β2对体外培养的骨髓间质前体细胞向软骨分化的影响.方法:实验于2005-12/2007-01在中日友好医院临床研究所骨科实验室完成.①骨髓标本来源于6名志愿者,对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:志愿者局麻下行骨髓穿刺,抽取7.0～10.0 mL骨髓抗凝,以密度梯度离心法分离人骨髓间质前体细胞,通过脂质体介导转染技术,将pcDNA3.1(+)TGF-β2载体导入骨髓间质前体细胞中,体外单层培养.③实验评估:利用RT-PCR、Western Blotting和免疫组化法检测转化生长因子β2和软骨相关基因、蛋白的表达情况.结果:①转染后48 h,可检测到明显的转化生长因子β2 mRNA表达,Ⅱ型胶原A1和Aggrecan mRNA均有轻微表达;转染后4周,转化牛长因子β2 mRNA表达稍有降低,Ⅱ型胶原A1和Aggrecan mRNA表达均明显上调.②转染后48 h和4周,间质前体细胞培养上清液中均有转化生长因子β2蛋白的表达.③转染后48 h部分细胞显示Ⅱ型胶原蛋白免疫组化阳性信号,转染后4周Ⅱ型胶原蛋白阳性细胞数增加.结论:pcDNA3.1(+)/TGF-β2真核表达载体在骨髓间质前体细胞内可获得短暂和长期表达.在单层培养的情况下,骨髓间质前体细胞可被转化生长因子β2诱导向软骨方向分化.
목적:골수중포함적간질전체세포재괄의적조건하가이피허다세포인자유도분화위연골.채용기인전염기술관찰전화생장인자β2대체외배양적골수간질전체세포향연골분화적영향.방법:실험우2005-12/2007-01재중일우호의원림상연구소골과실험실완성.①골수표본래원우6명지원자,대치료급실험균첨서지정동의서,실험경의원의학윤리위원회비준.②실험방법:지원자국마하행골수천자,추취7.0～10.0 mL골수항응,이밀도제도리심법분리인골수간질전체세포,통과지질체개도전염기술,장pcDNA3.1(+)TGF-β2재체도입골수간질전체세포중,체외단층배양.③실험평고:이용RT-PCR、Western Blotting화면역조화법검측전화생장인자β2화연골상관기인、단백적표체정황.결과:①전염후48 h,가검측도명현적전화생장인자β2 mRNA표체,Ⅱ형효원A1화Aggrecan mRNA균유경미표체;전염후4주,전화우장인자β2 mRNA표체초유강저,Ⅱ형효원A1화Aggrecan mRNA표체균명현상조.②전염후48 h화4주,간질전체세포배양상청액중균유전화생장인자β2단백적표체.③전염후48 h부분세포현시Ⅱ형효원단백면역조화양성신호,전염후4주Ⅱ형효원단백양성세포수증가.결론:pcDNA3.1(+)/TGF-β2진핵표체재체재골수간질전체세포내가획득단잠화장기표체.재단층배양적정황하,골수간질전체세포가피전화생장인자β2유도향연골방향분화.