农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
4期
586-592
,共7页
刘斌%张利平%吴建平%马彬云%高凤芹%杨联
劉斌%張利平%吳建平%馬彬雲%高鳳芹%楊聯
류빈%장리평%오건평%마빈운%고봉근%양련
牦牛%金属硫蛋白%分子克隆%3'-RACE%cDNA
牦牛%金屬硫蛋白%分子剋隆%3'-RACE%cDNA
모우%금속류단백%분자극륭%3'-RACE%cDNA
分别利用基因特异引物YMT-ⅠSP、YMT-ⅢSP和M13引物M4,通过RT-PCR和3'-RACE方法从牦牛(Bos grunniens)肝脏和大脑组织RNA中分别扩增并克隆出了牦牛Metallothionein-I(MT-I)和Metallothionein-Ⅲ(MT-Ⅲ)cDNA 3'末端全长序列(分别为331和378 bp,GenBank登录MT-Ⅰ No.AY758557,MT-Ⅲ No.DQ492300),其中分别包含MT-Ⅰ基因编码区全长(183 bp)、MT-Ⅲ基因编码区全长(207 bp),同时在MT-Ⅰ和MT-Ⅲ基因cDNA的3'末端具有加尾信号AATAAA和多聚腺苷酸尾巴Poly(A).分析表明,牦牛MT-Ⅰ基因编码的MT-Ⅰ蛋白由61个氨基酸组成,其中20个半胱氨酸(Cys)具有保守的三肽结构:C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C等,在分子进化上十分保守;MT-Ⅲ编码的蛋白质由68个氨基酸组成,其中19个Cys除了具有与MT-Ⅰ以上相同的保守短肽结构外,牦牛MT-Ⅲ蛋白质的氨基酸序列还具有T、CPCP、GEGAEA等MT-Ⅲ蛋白质特异的保守短肽结构,在分子进化上亦很保守.这些结构决定了MT-Ⅲ既具有与MT-Ⅰ相同的重金属解毒等生理功能,又具有区别于MT-Ⅰ的抑制神经元生长的特异功能.
分彆利用基因特異引物YMT-ⅠSP、YMT-ⅢSP和M13引物M4,通過RT-PCR和3'-RACE方法從牦牛(Bos grunniens)肝髒和大腦組織RNA中分彆擴增併剋隆齣瞭牦牛Metallothionein-I(MT-I)和Metallothionein-Ⅲ(MT-Ⅲ)cDNA 3'末耑全長序列(分彆為331和378 bp,GenBank登錄MT-Ⅰ No.AY758557,MT-Ⅲ No.DQ492300),其中分彆包含MT-Ⅰ基因編碼區全長(183 bp)、MT-Ⅲ基因編碼區全長(207 bp),同時在MT-Ⅰ和MT-Ⅲ基因cDNA的3'末耑具有加尾信號AATAAA和多聚腺苷痠尾巴Poly(A).分析錶明,牦牛MT-Ⅰ基因編碼的MT-Ⅰ蛋白由61箇氨基痠組成,其中20箇半胱氨痠(Cys)具有保守的三肽結構:C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C等,在分子進化上十分保守;MT-Ⅲ編碼的蛋白質由68箇氨基痠組成,其中19箇Cys除瞭具有與MT-Ⅰ以上相同的保守短肽結構外,牦牛MT-Ⅲ蛋白質的氨基痠序列還具有T、CPCP、GEGAEA等MT-Ⅲ蛋白質特異的保守短肽結構,在分子進化上亦很保守.這些結構決定瞭MT-Ⅲ既具有與MT-Ⅰ相同的重金屬解毒等生理功能,又具有區彆于MT-Ⅰ的抑製神經元生長的特異功能.
분별이용기인특이인물YMT-ⅠSP、YMT-ⅢSP화M13인물M4,통과RT-PCR화3'-RACE방법종모우(Bos grunniens)간장화대뇌조직RNA중분별확증병극륭출료모우Metallothionein-I(MT-I)화Metallothionein-Ⅲ(MT-Ⅲ)cDNA 3'말단전장서렬(분별위331화378 bp,GenBank등록MT-Ⅰ No.AY758557,MT-Ⅲ No.DQ492300),기중분별포함MT-Ⅰ기인편마구전장(183 bp)、MT-Ⅲ기인편마구전장(207 bp),동시재MT-Ⅰ화MT-Ⅲ기인cDNA적3'말단구유가미신호AATAAA화다취선감산미파Poly(A).분석표명,모우MT-Ⅰ기인편마적MT-Ⅰ단백유61개안기산조성,기중20개반광안산(Cys)구유보수적삼태결구:C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C등,재분자진화상십분보수;MT-Ⅲ편마적단백질유68개안기산조성,기중19개Cys제료구유여MT-Ⅰ이상상동적보수단태결구외,모우MT-Ⅲ단백질적안기산서렬환구유T、CPCP、GEGAEA등MT-Ⅲ단백질특이적보수단태결구,재분자진화상역흔보수.저사결구결정료MT-Ⅲ기구유여MT-Ⅰ상동적중금속해독등생리공능,우구유구별우MT-Ⅰ적억제신경원생장적특이공능.
