CAJ | 학술논문

背景: 心肌肌钙蛋白在检测心肌梗死的诊断中有极其重要的临床意义.目的: 将荧光标记物5-iodoaccetamidofluorescein(5-IAF)应用于心肌肌钙蛋白,观察其足否可用作与收缩调节蛋白之间相互作用的研究.设计、时间及地点: 随机对照实验,于2002-01/2005-12在广州医学院人体解剖教研室完成.材料: 成年兔,由广州医学院实验动物中心提供.方法: 利用反转录-聚合酶链反应技术制备兔心肌肌钙蛋白C的基因片段,应用基因重组技术将兔心肌肌钙蛋白C基因片段克隆到pET表达载体,根据PCR定点诱变的方法,取得突变型的兔cTnC(C35S),分别将5-IAF和2-(4'-(iodoacetamido)anilino)naphthalene-6sulfonic acid(IAANS)标记在兔肌钙蛋白C(C35S),并进行恒态荧光测定和时间-分辨荧光测定.主要观察指标: 兔cTnC(C35S)-IAF及cTnC(C35S)-IAANS的荧光特性.结果: 5-IAF标记的兔肌钙蛋白C在波长491 nm处进行激发,其发射峰值出现在波长520nm处,加入饱和的镁离子可导致荧光强度减少35%,继续用饱和的钙离子滴定,其荧光强度再减少35%,而且波峰向蓝光方向移动3 nm.IAANS标记的cTnC(C35S)在加进镁离子和钙离子后引起的荧光反射的跃迁,并不出现在用5-IAF标记的cTnC上.然而,不管使用哪一种荧光标记物,钙引起cTnc的构象变化这个作用并没有改变.钙滴定实验表明,两种荧光标记物标记的荧光发射结合参数是一致的.结论: 5-IAF标记可以应用于心肌肌钙蛋白与其他收缩调节蛋白之间相互作用的研究.
배경: 심기기개단백재검측심기경사적진단중유겁기중요적림상의의.목적: 장형광표기물5-iodoaccetamidofluorescein(5-IAF)응용우심기기개단백,관찰기족부가용작여수축조절단백지간상호작용적연구.설계、시간급지점: 수궤대조실험,우2002-01/2005-12재엄주의학원인체해부교연실완성.재료: 성년토,유엄주의학원실험동물중심제공.방법: 이용반전록-취합매련반응기술제비토심기기개단백C적기인편단,응용기인중조기술장토심기기개단백C기인편단극륭도pET표체재체,근거PCR정점유변적방법,취득돌변형적토cTnC(C35S),분별장5-IAF화2-(4'-(iodoacetamido)anilino)naphthalene-6sulfonic acid(IAANS)표기재토기개단백C(C35S),병진행항태형광측정화시간-분변형광측정.주요관찰지표: 토cTnC(C35S)-IAF급cTnC(C35S)-IAANS적형광특성.결과: 5-IAF표기적토기개단백C재파장491 nm처진행격발,기발사봉치출현재파장520nm처,가입포화적미리자가도치형광강도감소35%,계속용포화적개리자적정,기형광강도재감소35%,이차파봉향람광방향이동3 nm.IAANS표기적cTnC(C35S)재가진미리자화개리자후인기적형광반사적약천,병불출현재용5-IAF표기적cTnC상.연이,불관사용나일충형광표기물,개인기cTnc적구상변화저개작용병몰유개변.개적정실험표명,량충형광표기물표기적형광발사결합삼수시일치적.결론: 5-IAF표기가이응용우심기기개단백여기타수축조절단백지간상호작용적연구.