CAJ | 학술논문

目的:利用λRed重组系统敲除伤寒沙门氏菌的rfaH基因.方法:以伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi Ty2,S.ty2)基因组为模板扩增得到的同源臂,与两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化S.ty2;在抗生素压力和λRed重组系统帮助下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过卡那抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌;转入重组酶表达质粒pCP20以去除抗性标记,得到保留单一FRT位点的突变菌株;通过PCR鉴定重组菌,并经透射电子显微镜分析表型.结果:在S.ty2中敲除了rfaH基因,经PCR扩增和序列测定正确;初步的表型分析表明突变体的鞭毛合成显著减少.结论:获得了S.ty2突变株,为将沙门氏菌进一步减毒成为疫苗表达载体奠定了基础.
목적:이용λRed중조계통고제상한사문씨균적rfaH기인.방법:이상한사문씨균(Salmonella typhi Ty2,S.ty2)기인조위모판확증득도적동원비,여량단대유FRT위점적잡나매소항성기인편단공동구건동원중조재체;이중조재체위모판확증타파편단,장기전화S.ty2;재항생소압력화λRed중조계통방조하,타파편단화균체기인조발생동원중조,통과잡나항성사선득도대유항성표기적중조균;전입중조매표체질립pCP20이거제항성표기,득도보류단일FRT위점적돌변균주;통과PCR감정중조균,병경투사전자현미경분석표형.결과:재S.ty2중고제료rfaH기인,경PCR확증화서렬측정정학;초보적표형분석표명돌변체적편모합성현저감소.결론:획득료S.ty2돌변주,위장사문씨균진일보감독성위역묘표체재체전정료기출.