CAJ | 학술논문

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入.用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核农壳蛋白的鼠源多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位.结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位.
이구건적함유편마저류행성복사병독CV777주핵의각단백(N)기인적양성질립pMDT-18-N위모판,용함유Kpn Ⅰ화Xho Ⅰ매절위점적상、하유인물확증획득N기인,해PCR산물경Kpn Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절후정향극륭도경상동쌍매절적진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,경과매절감정화측서감정,장구건적중조질립명명위pcD-NA3.1(+)-N,차미발현감기적결실화삽입.용지질체법장pcDNA3.1(+)-N전염Vero E6세포,재48 h후,이침대저류행성복사병독핵농각단백적서원다항혈청진행Western blot、면역형광검측,병운용공취초현미경분석N단백적아세포정위.결과표명N기인능재진핵세포Vero E6중정학표체,공취초분석결과표명N단백재세포질화세포핵중정위.