沈阳农业大学学报
瀋暘農業大學學報
침양농업대학학보
JOURNAL OF SHENYANG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2009年
3期
335-338
,共4页
闻雅男%王学英%夏润玺%王媛媛
聞雅男%王學英%夏潤璽%王媛媛
문아남%왕학영%하윤새%왕원원
黑曲霉%phyA基因%大肠杆菌%克隆载体%高效表达
黑麯黴%phyA基因%大腸桿菌%剋隆載體%高效錶達
흑곡매%phyA기인%대장간균%극륭재체%고효표체
为获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生物生物制剂,从自行筛选的黑曲霉中提取RNA.通过反转录合成模板cDNA,根据pyhA成熟肽编码序列设计出一对引物,PCR扩增phrA,对扩增片段进行了克隆,通过限制性内切酶酶切分析、DNA测序证明phyA基因克隆成功.从pBS-T-phyA克隆中获取phya编码序列,将其与pET28a+质粒连接,构建pET28a+-phyA重组质粒,并在大肠杆菌中获得高效表达.本研究成功克隆phyA,该基因全长1404bp,以ATG为起始密码子,TGA为终止密码子,编码467个氨基酸组成的多肽.SDS-PAGE电泳结果表明,phyA在大肠杆菌中成功表达,成熟植酸酶的分子量约为51kDa.在0.4g·L-1的IPTG的诱导下,植酸酶活性最大(1174U).
為穫得大量、高活性植痠酶以及研究和開髮新型微生物生物製劑,從自行篩選的黑麯黴中提取RNA.通過反轉錄閤成模闆cDNA,根據pyhA成熟肽編碼序列設計齣一對引物,PCR擴增phrA,對擴增片段進行瞭剋隆,通過限製性內切酶酶切分析、DNA測序證明phyA基因剋隆成功.從pBS-T-phyA剋隆中穫取phya編碼序列,將其與pET28a+質粒連接,構建pET28a+-phyA重組質粒,併在大腸桿菌中穫得高效錶達.本研究成功剋隆phyA,該基因全長1404bp,以ATG為起始密碼子,TGA為終止密碼子,編碼467箇氨基痠組成的多肽.SDS-PAGE電泳結果錶明,phyA在大腸桿菌中成功錶達,成熟植痠酶的分子量約為51kDa.在0.4g·L-1的IPTG的誘導下,植痠酶活性最大(1174U).
위획득대량、고활성식산매이급연구화개발신형미생물생물제제,종자행사선적흑곡매중제취RNA.통과반전록합성모판cDNA,근거pyhA성숙태편마서렬설계출일대인물,PCR확증phrA,대확증편단진행료극륭,통과한제성내절매매절분석、DNA측서증명phyA기인극륭성공.종pBS-T-phyA극륭중획취phya편마서렬,장기여pET28a+질립련접,구건pET28a+-phyA중조질립,병재대장간균중획득고효표체.본연구성공극륭phyA,해기인전장1404bp,이ATG위기시밀마자,TGA위종지밀마자,편마467개안기산조성적다태.SDS-PAGE전영결과표명,phyA재대장간균중성공표체,성숙식산매적분자량약위51kDa.재0.4g·L-1적IPTG적유도하,식산매활성최대(1174U).
