小鼠BTLA胞外段腺相关病毒载体的构建和表达
소서BTLA포외단선상관병독재체적구건화표체
Construction and Expression of Adeno-associated Virus Vector of Mouse Soluble BTLA
  • 万方数据
    华中科技大学学报（医学版） 화중과기대학학보（의학판）
    ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
    2010年 2期 232-235 ,共4页

    韩凌斐%王玲%邱伟民%姚红霞%胡程%卞政%马衣努尔·买提托合提%方勇%马丁

    한릉비%왕령%구위민%요홍하%호정%변정%마의노이·매제탁합제%방용%마정

    B/T淋巴细胞弱化因子%腺相关病毒%基因克隆%真核表达 B/T淋巴細胞弱化因子%腺相關病毒%基因剋隆%真覈錶達
    B/T림파세포약화인자%선상관병독%기인극륭%진핵표체
    目的 构建小鼠B/T淋巴细胞弱化因子(BTLA)胞外段的腺相关病毒载体,并感染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)进行真核表达.方法 从C57BL/6小鼠脾脏中提取总RNA,经RT-PCR 扩增BTLA 胞外段,然后将其克隆到腺相关病毒载体的骨架质粒中,构建重组骨架质粒psBTLA.重组质粒经双酶切鉴定及测序正确后,与pHELP质粒以及pRC质粒3质粒共转染293T细胞,收获含病毒的上清后用氯仿-PEG8000的方法进行纯化浓缩,再用浓缩后的病毒液感染CHO细胞,并用SDS-PAGE和Western blot检测BTLA胞外段的表达.结果 获得长度为502 bp的小鼠BTLA胞外段基因,经测序证实其序列正确.含有BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体感染CHO细胞后,SDS-PAGE和Western blot分析证实感染的CHO细胞可表达出约21 kD的BTLA胞外段蛋白.结论 成功构建小鼠BTLA胞外段基因的腺相关病毒载体,并感染CHO细胞后表达出相应蛋白,为进一步研究BTLA胞外段的功能效应奠定实验基础.
    목적 구건소서B/T림파세포약화인자(BTLA)포외단적선상관병독재체,병감염중국창서란소상피세포(CHO)진행진핵표체.방법 종C57BL/6소서비장중제취총RNA,경RT-PCR 확증BTLA 포외단,연후장기극륭도선상관병독재체적골가질립중,구건중조골가질립psBTLA.중조질립경쌍매절감정급측서정학후,여pHELP질립이급pRC질립3질립공전염293T세포,수획함병독적상청후용록방-PEG8000적방법진행순화농축,재용농축후적병독액감염CHO세포,병용SDS-PAGE화Western blot검측BTLA포외단적표체.결과 획득장도위502 bp적소서BTLA포외단기인,경측서증실기서렬정학.함유BTLA포외단기인적선상관병독재체감염CHO세포후,SDS-PAGE화Western blot분석증실감염적CHO세포가표체출약21 kD적BTLA포외단단백.결론 성공구건소서BTLA포외단기인적선상관병독재체,병감염CHO세포후표체출상응단백,위진일보연구BTLA포외단적공능효응전정실험기출.
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