中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2010年
19期
3441-3445
,共5页
陈静娟%李华%许志恩%柯俊龙
陳靜娟%李華%許誌恩%柯俊龍
진정연%리화%허지은%가준룡
无血清培养%巢蛋白%骨髓源性%神经干细胞%骨髓间充质干细胞
無血清培養%巢蛋白%骨髓源性%神經榦細胞%骨髓間充質榦細胞
무혈청배양%소단백%골수원성%신경간세포%골수간충질간세포
背景:传统的胚胎来源和脑来源的神经干细胞由于取材困难,并受伦理道德的约束,应用受到极大限制. 目的:拟利用无血清神经培养基体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞.方法:抽取大鼠股骨和胫骨的骨髓,采用全骨髓培养及贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞周期及细胞免疫表型,油红O染色及鸶茜素红染色鉴定其成骨、成脂能力.取传至4~6代的大鼠骨髓间充质千细胞.加入含表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、B27的DMEM/F12无血清神经培养基进行诱导,采用免疫荧光染色及流式细胞仪予以鉴定. 结果与结论:P5骨髓间充质千细胞(91.5±3.1)%处于G1期.高表达CD90及CD29,不表达CD45及CD34,成脂诱导后在胞质中可见桔红色脂滴,成骨诱导后可见黑色矿化结节.骨髓源性神经干细胞巢蛋白免疫荧光染色呈阳性,流式细胞仪检测其阳性率为(97.2±1.1)%,NSE,β-Tubulin,GFAP及MAP-2抗原免疫荧光染色均呈阳性表达.表明在无血清神经培养基中加入特定生长因子,骨髓间充质干细胞可诱导为神经干细胞:在体外适当条件下,骨髓源性神经干细胞具有增殖和分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力.
揹景:傳統的胚胎來源和腦來源的神經榦細胞由于取材睏難,併受倫理道德的約束,應用受到極大限製. 目的:擬利用無血清神經培養基體外培養大鼠骨髓源性神經榦細胞.方法:抽取大鼠股骨和脛骨的骨髓,採用全骨髓培養及貼壁篩選法分離培養骨髓間充質榦細胞,流式細胞儀檢測細胞週期及細胞免疫錶型,油紅O染色及鷥茜素紅染色鑒定其成骨、成脂能力.取傳至4~6代的大鼠骨髓間充質韆細胞.加入含錶皮生長因子、堿性成纖維生長因子、B27的DMEM/F12無血清神經培養基進行誘導,採用免疫熒光染色及流式細胞儀予以鑒定. 結果與結論:P5骨髓間充質韆細胞(91.5±3.1)%處于G1期.高錶達CD90及CD29,不錶達CD45及CD34,成脂誘導後在胞質中可見桔紅色脂滴,成骨誘導後可見黑色礦化結節.骨髓源性神經榦細胞巢蛋白免疫熒光染色呈暘性,流式細胞儀檢測其暘性率為(97.2±1.1)%,NSE,β-Tubulin,GFAP及MAP-2抗原免疫熒光染色均呈暘性錶達.錶明在無血清神經培養基中加入特定生長因子,骨髓間充質榦細胞可誘導為神經榦細胞:在體外適噹條件下,骨髓源性神經榦細胞具有增殖和分化為神經元、星形膠質細胞及少突膠質細胞的能力.
배경:전통적배태래원화뇌래원적신경간세포유우취재곤난,병수윤리도덕적약속,응용수도겁대한제. 목적:의이용무혈청신경배양기체외배양대서골수원성신경간세포.방법:추취대서고골화경골적골수,채용전골수배양급첩벽사선법분리배양골수간충질간세포,류식세포의검측세포주기급세포면역표형,유홍O염색급사천소홍염색감정기성골、성지능력.취전지4~6대적대서골수간충질천세포.가입함표피생장인자、감성성섬유생장인자、B27적DMEM/F12무혈청신경배양기진행유도,채용면역형광염색급류식세포의여이감정. 결과여결론:P5골수간충질천세포(91.5±3.1)%처우G1기.고표체CD90급CD29,불표체CD45급CD34,성지유도후재포질중가견길홍색지적,성골유도후가견흑색광화결절.골수원성신경간세포소단백면역형광염색정양성,류식세포의검측기양성솔위(97.2±1.1)%,NSE,β-Tubulin,GFAP급MAP-2항원면역형광염색균정양성표체.표명재무혈청신경배양기중가입특정생장인자,골수간충질간세포가유도위신경간세포:재체외괄당조건하,골수원성신경간세포구유증식화분화위신경원、성형효질세포급소돌효질세포적능력.