检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2011年
11期
773-778
,共6页
曾国君%赵缜%彭奕冰%季育华%孙佳彬%卫蓓文%刘璐
曾國君%趙縝%彭奕冰%季育華%孫佳彬%衛蓓文%劉璐
증국군%조진%팽혁빙%계육화%손가빈%위배문%류로
真菌%DNA提取%真菌通用聚合酶链反应
真菌%DNA提取%真菌通用聚閤酶鏈反應
진균%DNA제취%진균통용취합매련반응
目的 改良真菌基因组DNA的提取方法,建立真菌通用聚合酶链反应(PCR),为目前临床真菌感染的早期诊断、预防和治疗提供有效工具.方法 参考前人报道的多种真菌基因组DNA的提取方法,作改良以确立本研究中所采纳的手段,并应用真菌核糖体DNA(rDNA)通用引物,以实验室保存的标准菌株及临床分离菌株来建立临床真菌感染检测用通用PCR.结果 白念珠菌和烟曲霉在75℃温度下分别作用60和80 min可以完全破灭活.经目前多种破壁方法的探讨,发现对于白念珠菌(单细胞真菌)选用酶消化法,破壁效率高达98.29％,而烟曲霉(多细胞真菌)则需要酶消化法与打击器振荡法联合应用,其破壁率也可达66.68％,进一步用酚氯仿法抽提其基因组DNA,能够获得相对纯度高且有一定得量.当选择真菌rDNAITS2区间的一对通用引物,通过PCR反应体系的优化,使得本研究中建立的通用PCR,对于白念珠菌和烟曲霉的检测下限分别为5个和9.7个,其PCR产物测序结果与数据库比对完全一致,同时选择临床分离的或实验室保存的其他真菌、细菌和病毒株进行验证,该方法仅针对真菌群,结合测序分析可以实现种属水平的鉴定.结论 改良真菌基因组DNA提取后所建立的针对真菌rDNA的通用PCR敏感且特异,适宜实验室操作.
目的 改良真菌基因組DNA的提取方法,建立真菌通用聚閤酶鏈反應(PCR),為目前臨床真菌感染的早期診斷、預防和治療提供有效工具.方法 參攷前人報道的多種真菌基因組DNA的提取方法,作改良以確立本研究中所採納的手段,併應用真菌覈糖體DNA(rDNA)通用引物,以實驗室保存的標準菌株及臨床分離菌株來建立臨床真菌感染檢測用通用PCR.結果 白唸珠菌和煙麯黴在75℃溫度下分彆作用60和80 min可以完全破滅活.經目前多種破壁方法的探討,髮現對于白唸珠菌(單細胞真菌)選用酶消化法,破壁效率高達98.29％,而煙麯黴(多細胞真菌)則需要酶消化法與打擊器振盪法聯閤應用,其破壁率也可達66.68％,進一步用酚氯倣法抽提其基因組DNA,能夠穫得相對純度高且有一定得量.噹選擇真菌rDNAITS2區間的一對通用引物,通過PCR反應體繫的優化,使得本研究中建立的通用PCR,對于白唸珠菌和煙麯黴的檢測下限分彆為5箇和9.7箇,其PCR產物測序結果與數據庫比對完全一緻,同時選擇臨床分離的或實驗室保存的其他真菌、細菌和病毒株進行驗證,該方法僅針對真菌群,結閤測序分析可以實現種屬水平的鑒定.結論 改良真菌基因組DNA提取後所建立的針對真菌rDNA的通用PCR敏感且特異,適宜實驗室操作.
목적 개량진균기인조DNA적제취방법,건립진균통용취합매련반응(PCR),위목전림상진균감염적조기진단、예방화치료제공유효공구.방법 삼고전인보도적다충진균기인조DNA적제취방법,작개량이학립본연구중소채납적수단,병응용진균핵당체DNA(rDNA)통용인물,이실험실보존적표준균주급림상분리균주래건립림상진균감염검측용통용PCR.결과 백념주균화연곡매재75℃온도하분별작용60화80 min가이완전파멸활.경목전다충파벽방법적탐토,발현대우백념주균(단세포진균)선용매소화법,파벽효솔고체98.29％,이연곡매(다세포진균)칙수요매소화법여타격기진탕법연합응용,기파벽솔야가체66.68％,진일보용분록방법추제기기인조DNA,능구획득상대순도고차유일정득량.당선택진균rDNAITS2구간적일대통용인물,통과PCR반응체계적우화,사득본연구중건립적통용PCR,대우백념주균화연곡매적검측하한분별위5개화9.7개,기PCR산물측서결과여수거고비대완전일치,동시선택림상분리적혹실험실보존적기타진균、세균화병독주진행험증,해방법부침대진균군,결합측서분석가이실현충속수평적감정.결론 개량진균기인조DNA제취후소건립적침대진균rDNA적통용PCR민감차특이,괄의실험실조작.
