中国临床药理学杂志
中國臨床藥理學雜誌
중국림상약이학잡지
THE CHINESE JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY
2011年
11期
862-866
,共5页
RNA干扰%慢病毒%PRL -3基因%肝细胞癌
RNA榦擾%慢病毒%PRL -3基因%肝細胞癌
RNA간우%만병독%PRL -3기인%간세포암
目的 构建PRL -3基因RNA干扰慢病毒载体并建立被稳定感染的HepG2单克隆细胞株.方法 设计PRL -3基因特异性RNAi靶序列,合成靶序列的DNA oligo,退火形成双链DNA,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL- GFP线性化载体连接,产生重组慢病毒质粒LV - PRL3 - siRNA,转化感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并测序鉴定.用Lipofectamine 2000将LV - PRL3 -siRNA、pHelper 1.0和pHelper 2.0这3种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,经孔稀释法,测定病毒滴度.重组慢病毒感染肝癌HepG2细胞,进行RealTime - PCR和Western - Blot验证PRL -3基因的沉默效果,筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆细胞株.结果 成功构建PRL -3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6E+8 Tu·mL-.重组慢病毒对HepG2细胞PRL -3基因表达有明显沉默作用,其中第一干扰序列效果最明显.筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株.结论 成功构建人PRL -3基因特异性的慢病毒干扰载体,并筛选出最佳干扰序列组及阴性对照组的单克隆肝癌细胞株.
目的 構建PRL -3基因RNA榦擾慢病毒載體併建立被穩定感染的HepG2單剋隆細胞株.方法 設計PRL -3基因特異性RNAi靶序列,閤成靶序列的DNA oligo,退火形成雙鏈DNA,與含綠色熒光蛋白(GFP)編碼基因的pGCL- GFP線性化載體連接,產生重組慢病毒質粒LV - PRL3 - siRNA,轉化感受態細胞,PCR篩選暘性剋隆,併測序鑒定.用Lipofectamine 2000將LV - PRL3 -siRNA、pHelper 1.0和pHelper 2.0這3種質粒共轉染293T細胞,包裝產生慢病毒,經孔稀釋法,測定病毒滴度.重組慢病毒感染肝癌HepG2細胞,進行RealTime - PCR和Western - Blot驗證PRL -3基因的沉默效果,篩選齣最佳榦擾序列組及陰性對照組的單剋隆細胞株.結果 成功構建PRL -3基因RNA榦擾慢病毒載體併穫得相應的慢病毒,濃縮病毒懸液的滴度為6E+8 Tu·mL-.重組慢病毒對HepG2細胞PRL -3基因錶達有明顯沉默作用,其中第一榦擾序列效果最明顯.篩選齣最佳榦擾序列組及陰性對照組的單剋隆肝癌細胞株.結論 成功構建人PRL -3基因特異性的慢病毒榦擾載體,併篩選齣最佳榦擾序列組及陰性對照組的單剋隆肝癌細胞株.
목적 구건PRL -3기인RNA간우만병독재체병건립피은정감염적HepG2단극륭세포주.방법 설계PRL -3기인특이성RNAi파서렬,합성파서렬적DNA oligo,퇴화형성쌍련DNA,여함록색형광단백(GFP)편마기인적pGCL- GFP선성화재체련접,산생중조만병독질립LV - PRL3 - siRNA,전화감수태세포,PCR사선양성극륭,병측서감정.용Lipofectamine 2000장LV - PRL3 -siRNA、pHelper 1.0화pHelper 2.0저3충질립공전염293T세포,포장산생만병독,경공희석법,측정병독적도.중조만병독감염간암HepG2세포,진행RealTime - PCR화Western - Blot험증PRL -3기인적침묵효과,사선출최가간우서렬조급음성대조조적단극륭세포주.결과 성공구건PRL -3기인RNA간우만병독재체병획득상응적만병독,농축병독현액적적도위6E+8 Tu·mL-.중조만병독대HepG2세포PRL -3기인표체유명현침묵작용,기중제일간우서렬효과최명현.사선출최가간우서렬조급음성대조조적단극륭간암세포주.결론 성공구건인PRL -3기인특이성적만병독간우재체,병사선출최가간우서렬조급음성대조조적단극륭간암세포주.
