CAJ | 학술논문

目的构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值.方法通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值.结果成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95％以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合.酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5％(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0％(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P＜0.0001).结论成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一.
목적 구건Mtb중조단백Rv0222적중조질립,평개기용우결핵병혈청학진단적개치.방법 통과PCR종Mtb염색체기인조중확증출Rv0222기인편단,삽입pMD18-T재체후,재아극륭입표체재체pET30a중,유도표체중조균,조안산표첨(His-tag)친화층석순화단백,통과면역인적법분석중조단백적면역반응성,통과간접ELISA방법검측142례혈청양본,래자82례결핵병환자(담도편혹담배양양성,항결핵치료증상감경자),28례비결핵병환자(8례폐암、15례폐염화5례폐기종)화32례건강체검자,검측수거통과전업의학연건MedCalc 11.5.0분석ROC곡선하면적화최가양성판정치.결과 성공구건중조재체,중조단백Rv0222경전영후현시상대분자질량약위27 000,얼주순화후단백순도체95％이상,통과단백면역인적법증실중조단백Rv0222여결핵병환자혈청능특이성결합.매련면역검측ROC곡선하면적위0.893,최가양성판정치위0.12시,결핵병환자조항체검측민감도위69.5％(57/82),비결핵병환자화건강체검자항체검측특이도위90.0％(54/60),결핵병환자여비결핵병환자급건강체검자상비,차이유통계학의의(t=25.78,P＜0.0001).결론 성공구건pET30a-Rv0222표체재체,획득고순도적중조단백Rv0222,ELISA결과현시Rv0222단백유망성위결핵병혈청학진단적유효항원지일.