CAJ | 학술논문

本研究在筛选猪化学辅助手工去核最佳脱羰秋水酰碱(Demecolcine,DC)浓度的基础上,探讨了各种因素对手工重构胚发育的影响,以期建立高效的猪手工体细胞核移植技术体系.观察不同成熟时间卵母细胞在不同DC浓度下的去核效率,并进一步比较了化学辅助手工去核法和荧光染色去核法、不同类型的供体细胞(颗粒细胞、新生巴马肌肉成纤维细胞和胎儿成纤维细胞)和供体细胞的不同处理方法(70％～80％汇合、血清饥饿法和100％接触抑制法)对重构胚发育能力的影响.结果表明:(1)利用DC诱导去核,对体外成熟培养44 h的卵母细胞以浓度0.4 μg· mL-1作用0.5～1 h为宜.(2)用DC化学辅助手工去核与用荧光染色去核的重构胚囊胚发育率差异不显著(13.11％ vs 9.25％,P＞0.05).(3)以胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和新生巴马小型猪肌肉成纤维细胞为供体构建的重构胚的融合率、卵裂率及囊胚率均差异不显著(P＞0.05).(4)用70％～80％汇合(对照组)组、接触抑制组和血清饥饿组的细胞作供体构建的重构胚,在融合率上,接触抑制组显著高于对照组(P＜0.05)；在分裂率与囊胚率上,各组之间均无显著差异(P＞0.05).研究结果表明,化学辅助手工去核法在实际生产中可以替代荧光染色去核法,能省去去核过程中荧光染色及紫外光照射去核等步骤,从而简化了猪手工体细胞核移植程序,提高了猪手工体细胞核移植效率,能为高效的猪手工体细胞核移植技术体系的建立提供参考.
본연구재사선저화학보조수공거핵최가탈탄추수선감(Demecolcine,DC)농도적기출상,탐토료각충인소대수공중구배발육적영향,이기건립고효적저수공체세포핵이식기술체계.관찰불동성숙시간란모세포재불동DC농도하적거핵효솔,병진일보비교료화학보조수공거핵법화형광염색거핵법、불동류형적공체세포(과립세포、신생파마기육성섬유세포화태인성섬유세포)화공체세포적불동처리방법(70％～80％회합、혈청기아법화100％접촉억제법)대중구배발육능력적영향.결과표명:(1)이용DC유도거핵,대체외성숙배양44 h적란모세포이농도0.4 μg· mL-1작용0.5～1 h위의.(2)용DC화학보조수공거핵여용형광염색거핵적중구배낭배발육솔차이불현저(13.11％ vs 9.25％,P＞0.05).(3)이태인성섬유세포、과립세포화신생파마소형저기육성섬유세포위공체구건적중구배적융합솔、란렬솔급낭배솔균차이불현저(P＞0.05).(4)용70％～80％회합(대조조)조、접촉억제조화혈청기아조적세포작공체구건적중구배,재융합솔상,접촉억제조현저고우대조조(P＜0.05)；재분렬솔여낭배솔상,각조지간균무현저차이(P＞0.05).연구결과표명,화학보조수공거핵법재실제생산중가이체대형광염색거핵법,능성거거핵과정중형광염색급자외광조사거핵등보취,종이간화료저수공체세포핵이식정서,제고료저수공체세포핵이식효솔,능위고효적저수공체세포핵이식기술체계적건립제공삼고.