热带病与寄生虫学
熱帶病與寄生蟲學
열대병여기생충학
TROPICAL DISEASES AND PARASITOLOGY
2012年
1期
11-13,16
,共4页
钙网蛋白%基因表达%日本血吸虫
鈣網蛋白%基因錶達%日本血吸蟲
개망단백%기인표체%일본혈흡충
目的 为了寻找日本血吸虫病新的免疫学候选分子,克隆日本血吸虫钙网蛋白(calreticulin,CRT)编码基因,并进行表达、鉴定.方法 以日本血吸虫cDNA为模板,PCR扩增SjCRT编码基因,并与pGEM-T连接进行亚克隆,双酶切后回收目的基因,并与表达载体pET28a(+)连接,PCR和双酶切鉴定后测序.IPTG诱导表达重组质粒pET28a-SjCRT,进行SDS变性蛋白质电泳和Western-blot分析,用亲和层析纯化获得重组蛋白.结果 成功地构建了重组质粒pET28a-SjCRT,SDS变性蛋白质电泳显示可见一与预期分子量大小相符的特异蛋白条带的表达.Western blotting分析表明,该重组蛋白能被血吸虫感染小鼠阳性血清识别.亲和层析纯化获得SjCRT重组蛋白.结论 重组质粒SjCRT的构建和重组蛋白的表达和纯化,为进一步探讨其在血吸虫病疫苗和诊断中的应用奠定了基础.
目的 為瞭尋找日本血吸蟲病新的免疫學候選分子,剋隆日本血吸蟲鈣網蛋白(calreticulin,CRT)編碼基因,併進行錶達、鑒定.方法 以日本血吸蟲cDNA為模闆,PCR擴增SjCRT編碼基因,併與pGEM-T連接進行亞剋隆,雙酶切後迴收目的基因,併與錶達載體pET28a(+)連接,PCR和雙酶切鑒定後測序.IPTG誘導錶達重組質粒pET28a-SjCRT,進行SDS變性蛋白質電泳和Western-blot分析,用親和層析純化穫得重組蛋白.結果 成功地構建瞭重組質粒pET28a-SjCRT,SDS變性蛋白質電泳顯示可見一與預期分子量大小相符的特異蛋白條帶的錶達.Western blotting分析錶明,該重組蛋白能被血吸蟲感染小鼠暘性血清識彆.親和層析純化穫得SjCRT重組蛋白.結論 重組質粒SjCRT的構建和重組蛋白的錶達和純化,為進一步探討其在血吸蟲病疫苗和診斷中的應用奠定瞭基礎.
목적 위료심조일본혈흡충병신적면역학후선분자,극륭일본혈흡충개망단백(calreticulin,CRT)편마기인,병진행표체、감정.방법 이일본혈흡충cDNA위모판,PCR확증SjCRT편마기인,병여pGEM-T련접진행아극륭,쌍매절후회수목적기인,병여표체재체pET28a(+)련접,PCR화쌍매절감정후측서.IPTG유도표체중조질립pET28a-SjCRT,진행SDS변성단백질전영화Western-blot분석,용친화층석순화획득중조단백.결과 성공지구건료중조질립pET28a-SjCRT,SDS변성단백질전영현시가견일여예기분자량대소상부적특이단백조대적표체.Western blotting분석표명,해중조단백능피혈흡충감염소서양성혈청식별.친화층석순화획득SjCRT중조단백.결론 중조질립SjCRT적구건화중조단백적표체화순화,위진일보탐토기재혈흡충병역묘화진단중적응용전정료기출.
