四川医学
四川醫學
사천의학
SICHUAN MEDICAL JOURNAL
2012年
2期
195-198
,共4页
张五星%周伟%赵学伟%丁晓然%周喆%张智敏%周焕芝%石炳毅
張五星%週偉%趙學偉%丁曉然%週喆%張智敏%週煥芝%石炳毅
장오성%주위%조학위%정효연%주철%장지민%주환지%석병의
信号转导子及转录激活子3( STAT3)%短发夹RNA(shRNA)%慢病毒载体%RNA干扰(RNAi)
信號轉導子及轉錄激活子3( STAT3)%短髮夾RNA(shRNA)%慢病毒載體%RNA榦擾(RNAi)
신호전도자급전록격활자3( STAT3)%단발협RNA(shRNA)%만병독재체%RNA간우(RNAi)
目的 在已经成功构建4个针对STAT3的shRNA质粒表达载体的基础上,筛选出干扰效果最佳者进行慢病毒包装并鉴定.方法 将STAT3的干扰质粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空载体对照),Control2(无效shRNA对照)分别转染目的细胞(大鼠肾小球系膜细胞),48h后收集细胞提取mRNA,以RT-PCR检测各组分STAT3表达量.对于筛选所得干扰效果最佳的质粒,采用pPACKH1 TM慢病毒载体系统进行病毒包装.利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对感染效率及病毒滴度进行检测.结果 RT-PCR检测结果显示,shRNA3样品受干扰的效果最佳.成功构建了慢病毒载体Lenti-shRNA3,共转染293T细胞24h、48h,荧光显微镜下可见强绿色荧光,细胞生长状态良好,表明病毒包装成功.转染HT1080细胞,收集慢病毒液,测定病毒滴度为3.34×108ifu/ml,适合感染目的细胞.结论 成功构建了STAT3基因的shRNA慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础.
目的 在已經成功構建4箇針對STAT3的shRNA質粒錶達載體的基礎上,篩選齣榦擾效果最佳者進行慢病毒包裝併鑒定.方法 將STAT3的榦擾質粒shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4及Control1(空載體對照),Control2(無效shRNA對照)分彆轉染目的細胞(大鼠腎小毬繫膜細胞),48h後收集細胞提取mRNA,以RT-PCR檢測各組分STAT3錶達量.對于篩選所得榦擾效果最佳的質粒,採用pPACKH1 TM慢病毒載體繫統進行病毒包裝.利用綠色熒光蛋白作為報告基因,對感染效率及病毒滴度進行檢測.結果 RT-PCR檢測結果顯示,shRNA3樣品受榦擾的效果最佳.成功構建瞭慢病毒載體Lenti-shRNA3,共轉染293T細胞24h、48h,熒光顯微鏡下可見彊綠色熒光,細胞生長狀態良好,錶明病毒包裝成功.轉染HT1080細胞,收集慢病毒液,測定病毒滴度為3.34×108ifu/ml,適閤感染目的細胞.結論 成功構建瞭STAT3基因的shRNA慢病毒錶達載體,為進一步應用奠定瞭基礎.
목적 재이경성공구건4개침대STAT3적shRNA질립표체재체적기출상,사선출간우효과최가자진행만병독포장병감정.방법 장STAT3적간우질립shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4급Control1(공재체대조),Control2(무효shRNA대조)분별전염목적세포(대서신소구계막세포),48h후수집세포제취mRNA,이RT-PCR검측각조분STAT3표체량.대우사선소득간우효과최가적질립,채용pPACKH1 TM만병독재체계통진행병독포장.이용록색형광단백작위보고기인,대감염효솔급병독적도진행검측.결과 RT-PCR검측결과현시,shRNA3양품수간우적효과최가.성공구건료만병독재체Lenti-shRNA3,공전염293T세포24h、48h,형광현미경하가견강록색형광,세포생장상태량호,표명병독포장성공.전염HT1080세포,수집만병독액,측정병독적도위3.34×108ifu/ml,괄합감염목적세포.결론 성공구건료STAT3기인적shRNA만병독표체재체,위진일보응용전정료기출.
