四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2012年
5期
1159-1163
,共5页
陈存%唐天元%杨虹伟%蔡黎%杨毅%李旭锋
陳存%唐天元%楊虹偉%蔡黎%楊毅%李旭鋒
진존%당천원%양홍위%채려%양의%리욱봉
BnRCH%原核表达%E3连接酶
BnRCH%原覈錶達%E3連接酶
BnRCH%원핵표체%E3련접매
利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RING-variant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTK-BnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GST-BnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.
利用本實驗室前期以ATP6為誘餌蛋白,通過酵母雙雜交繫統篩選到的一箇N耑含有RINGv結構(RING-variant)的蛋白,暫命名為BnRCH,構建GTK-BnRCH錶達載體在原覈細胞E.coli BL21(DE3)中高效錶達GST-BnRCH融閤蛋白,併將純化的融閤蛋白加入體外汎素反應體繫,髮現BnRCH在ATP、汎素、E1、E2存在的條件下,能催化多聚汎素化形成,具有E3連接酶活性.
이용본실험실전기이ATP6위유이단백,통과효모쌍잡교계통사선도적일개N단함유RINGv결구(RING-variant)적단백,잠명명위BnRCH,구건GTK-BnRCH표체재체재원핵세포E.coli BL21(DE3)중고효표체GST-BnRCH융합단백,병장순화적융합단백가입체외범소반응체계,발현BnRCH재ATP、범소、E1、E2존재적조건하,능최화다취범소화형성,구유E3련접매활성.
