中国现代医药杂志
中國現代醫藥雜誌
중국현대의약잡지
MODERN MEDICINE JOURNAL OF CHINA
2008年
3期
8-11
,共4页
王胜芬%韩佩珍%穆传杰%赵明辉%卢圣栋
王勝芬%韓珮珍%穆傳傑%趙明輝%盧聖棟
왕성분%한패진%목전걸%조명휘%로골동
重组脂联素%融合蛋白%可溶性%生物学活性
重組脂聯素%融閤蛋白%可溶性%生物學活性
중조지련소%융합단백%가용성%생물학활성
目的 表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性.方法 从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实.将目的 序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实.将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的 蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的 蛋白经组氨酸镍螫和树脂亲和纯化.以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性.结果 小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被C置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代.序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达.表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43 000,Trx Mr为19 000.在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖.结论 小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同.成功地在E.coli中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性.
目的 錶達重組脂聯素融閤蛋白(adiponectin-Trx),併測定其生物學活性.方法 從小鼠脂肪組織提取總RNA,應用序列特異性引物經RT-PCR方法擴增穫得全長脂聯素基因序列,剋隆至pGEM-T載體,序列經DNA測序證實.將目的 序列(18-247氨基痠)亞剋隆至pET-32(a)錶達載體,重組質粒adiponectin/pET32(a)的序列經測序證實.將adiponectin/pET32(a)轉化錶達宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(異丙基-β-D-硫代半乳糖苷)誘導錶達目的 蛋白,SDS-PAGE和氨基痠測序檢測目的蛋白的錶達,目的 蛋白經組氨痠鎳螫和樹脂親和純化.以不同濃度的融閤蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白處理體外培養的人臍靜脈內皮細胞,細胞增殖法測定其生物學活性.結果 小鼠脂肪組織脂聯素基因的編碼序列,337位點上的堿基A被C置換,導緻在113位的蛋氨痠被纈氨痠取代.序列測定錶明,構建的重組錶達載體adiponectin/pET32a序列完全正確,誘導工程菌主要錶達可溶性的融閤蛋白adiponectin-Trx,部分以包含體形式錶達.錶達產物的相對分子量(Mr)同預期分子量相同,adiponectin-Trx Mr為43 000,Trx Mr為19 000.在低濃度時融閤蛋白刺激人臍靜脈內皮細胞增殖.結論 小鼠脂肪組織脂聯素基因編碼序列與來自3T3-L1脂肪細胞的編碼序列不同.成功地在E.coli中錶達瞭重組脂聯素融閤蛋白併具有生物學活性.
목적 표체중조지련소융합단백(adiponectin-Trx),병측정기생물학활성.방법 종소서지방조직제취총RNA,응용서렬특이성인물경RT-PCR방법확증획득전장지련소기인서렬,극륭지pGEM-T재체,서렬경DNA측서증실.장목적 서렬(18-247안기산)아극륭지pET-32(a)표체재체,중조질립adiponectin/pET32(a)적서렬경측서증실.장adiponectin/pET32(a)전화표체숙주균OrigamiTM(DE3),재27℃이1mmol/L IPTG(이병기-β-D-류대반유당감)유도표체목적 단백,SDS-PAGE화안기산측서검측목적단백적표체,목적 단백경조안산얼석화수지친화순화.이불동농도적융합단백adiponectin-Trx화Trx단백처리체외배양적인제정맥내피세포,세포증식법측정기생물학활성.결과 소서지방조직지련소기인적편마서렬,337위점상적감기A피C치환,도치재113위적단안산피힐안산취대.서렬측정표명,구건적중조표체재체adiponectin/pET32a서렬완전정학,유도공정균주요표체가용성적융합단백adiponectin-Trx,부분이포함체형식표체.표체산물적상대분자량(Mr)동예기분자량상동,adiponectin-Trx Mr위43 000,Trx Mr위19 000.재저농도시융합단백자격인제정맥내피세포증식.결론 소서지방조직지련소기인편마서렬여래자3T3-L1지방세포적편마서렬불동.성공지재E.coli중표체료중조지련소융합단백병구유생물학활성.
